实验三对羟基苯甲酸酯类混合物的r-hplc分析

《实验三对羟基苯甲酸酯类混合物的r-hplc分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、实验三对羟基苯甲酸酯类混合物的R-HPLC分析实验三、对羟基苯甲酸酯类混合物的RP-HPLC分析一、实验目的1.学习高效液相色谱保留值定性方法和归一化法定量；2.熟悉高效液相色谱分析操作。3.复习并掌握高效液相色谱的应用原理。二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯，它们都是强极性化合物，可采用反相高效液相色谱进行分析，选用非极性的C-18柱，甲醇和水按一定的配比做流动相。由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物

2、的各组分保留时间，与己知纯酯类各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各组分存在与否。这种利用纯物质对照进行定性的方法，适宜来源己知且组分简单的混合物。本实验采用归一化法定量，归一化法使用条件及计算公式，与气相色谱分析相同：%ci?fiAin?100i?lfiAi对羟基苯甲酸酯类混合物属于同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为:%ci?Ain?100?Aii?l三、仪器与试剂1.Agilent1100和Agilent1200高效液相色谱仪2.对羟基苯甲

3、酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯均为分析纯3.超纯水由纯水机制得，甲醇为色谱纯四、实验条件1.色谱柱（XDB-C18）颗粒度为5um的固定相，长150mm内径4.6mm2.流动相甲醇：水=60:40，流量1mL/min3.检测器紫外光度检测器，254nm4.进样量10uL五、实验步骤1.将流动相甲醇和水分别过滤后于超声波发生器上脱气15min。2.将配置好的分析试样分別过滤后于超声波发生器上脱气15min。3.接通仪器和电脑电源，打开计算机，自动出现并运行BootpServer程序（1200LC没有

4、出现此界面）。1.从上到下依次打开LC各模块电源。2.待各模快自检完成后，BootpServer窗口显示6行仪器与计算机连接正常的信号后，（注意：BootpServer程序窗口不能关），双击电脑桌面上的Instrument1Online图标，化学工作站白动与LC通讯，进入工作站画3.单击工作站画面的On按钮，系统Pump打开，并根据上次实验设定的流速和流动相开始工作（一般此时流动相是纯甲醇）。4.打开仪器上的Purgevalve,贝0系统开始Purge,单击Pump图标，将流速设到2mL/min直到管线内（由

5、溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。然后将流速设为0.5mL/min,再关闭Purgevalve。5.单击Pump图标，进入Pump编辑画面，先用0.5mL/min甲醇清洗仪器30min，待仪器液路和电路系统达到平衡时，压力稳定，基线呈平直，再设定实验所需的流速和流动相。6.单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。7.点VWD图标，设定实验所需波长。8.待设定参数后的仪器液路和电路系统达到平衡时，压力稳定，基线呈平直，将仪器调节至进样状态（Load位置），依

6、次分别用专用的平头针头吸取10uL的溶液进样并把进样阀扳到Inject位置。（每次进样前可在“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项，输入操作者名称等信息，在“Datafile”屮选择Prefix，并在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwdOOOl,vwd0002。）1.分析结束P，从Runcontrol菜单中选择最后一项，即停止进样分析，此时仪器自动记录并积分色谱图。2.打印色谱图。3.待所有样品分析完后，单出Pump图标，进入Pum

7、p编辑画面，准备清洗仪器，本实验用0.5mL/min的甲醇清洗仪器30min,若实验过程用到酸或缓冲盐做流动相，须先用0.5mL/min水清洗仪器60min,再用0.5mL/min的甲醇清洗仪器30min。4.当仪器冲洗干净后，单击工作站画面的Off按钮，关泵，退出化学工作站，关掉BootpServer窗口，关闭计算机，最后从下往上关掉LC电源开关。再关总电5.实验结朿后做好仪器使用情况登记，经实验指导老师签名后方可离开实验室。六、思考题1.本实验为什么采用反相高效液相色谱，试说明理由。2.高效液相色谱分析中

8、流动相及试样为什么都要过滤和脱气，不过滤和脱气对实验有何影响?