大蒜素对痢疾杆菌抑菌作用和其机制初步探析

《大蒜素对痢疾杆菌抑菌作用和其机制初步探析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、大蒜素对痢疾杆菌抑菌作用和其机制初步探析【摘要】目的：观察大蒜素对痢疾杆菌的抑菌效果,初步探讨大蒜素的抑菌机制。方法：采用K~B纸片法、液体稀释法检测大蒜素对痢疾杆菌的抑菌效果及最小抑菌浓度(MIC)值；采用SDS-PAGE电泳法，观察大蒜素作用下菌体蛋白质电泳图谱的变化。结果:大蒜素对痢疾杆菌的抑菌环直径为15.3±1.676305mm,MIC值为100ug/ml,在SDS-PAGE中，大蒜素作用后，痢疾杆菌的蛋白图谱有变化。结论：大蒜素对痢疾杆菌有抑菌作用，并影响菌体蛋白质的合成，初步揭示了大蒜素的作用机制

2、。【关键词】大蒜素；SDS-PAGE；抑菌机制；痢疾杆菌志贺菌属细菌通称痢疾杆菌，是一类具有高度传染性和危害严重的革兰阴性肠道致病菌，临床感染可导致细菌性痢疾(菌痢)。菌痢是世界上，尤其是发展中国家重要的传染病之一，全球每年的病例超过1.6亿，并导致100万患者死亡，其中绝大数为5岁以下的儿童［1］。目前，人们长期滥用抗生素造成了严重菌群失调和药物不良反应，因此，寻找一种不良反应少又有效的抗菌药物，是医学界努力的方向。大蒜为百合科植物，含有丰富的营养物质，又具有很高药用价值。原在法国、埃及等地早就用来佐餐、预防

3、疫彷，秦汉时期传人我国，我国食用大蒜及用大蒜治疗疾病历史悠久，据《本草纲目》记载，大蒜有解毒散臃肿、消毒气、除风破冷、健脾治世等功效［2］。研究表明，大蒜抗菌的有效成分是大蒜素。本研究主要观察大蒜素对痢疾杆菌的抑菌作用，并对其抑菌机制进行了初步探讨。1材料与方法1.1材料大蒜素（江苏正大清江制药有限公司）；福氏痢疾杆菌（本室保存，菌号：51571-10）；营养琼脂培养基、MH琼脂培养基、MH肉汤培养基（北京奥博星责任股份有限公司）;过硫酸铁、冰醋酸（天津市百世化工有限公司）；TEMED、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺

4、、Tris.SDS、B-硫基乙醇、考马斯亮蓝R-250（艾勒科技有限公司）；甲醇（天津市科锐思精细化工有限公司）；蛋白Marker（北京鼎国盛生物技术有限责任公司）；滤纸1・2仪器电泳槽（北京六一仪器厂，型号DYCZ-24DN）,电泳仪（北京六一仪器厂，型号DYY-6B型），摇床。1.3方法1.3.1大蒜素对痢疾杆菌的抑菌作用1.3.1.1菌悬液的制备福氏痢疾志贺菌于营养琼脂培养基平板培养37°C18-24h,用无菌生理盐水将新鲜平板培养物洗下，以MH肉汤培养基制成浓度为1.6X106cfu/ml的菌悬液。1.

5、3.1.2大蒜素液的制备用MH肉汤培养基溶解大蒜素粉末，制成0.5mg/ml的大蒜素液，备用。1.3.1.3大蒜素药敏纸片的制备将滤纸剪成直径为0.6cm的圆形纸片，12TC20mins高压灭菌冷却后，浸入上述大蒜素液中浸泡，备用［3］。1.3.1.4MH琼脂培养基制备将MH琼脂培养基粉末加蒸馆水溶解后，12TC20mins高压灭菌，冷却至约5(TC后注入120mm的玻璃培养皿中，待凝固后备用。1.3.1.5抑菌作用取lml上述浓度的菌悬液，涂布法均匀接种于MH琼脂培养皿中，将大蒜素药敏纸片贴于培养皿中心处，3

6、79培养24h后，测量抑菌圈的大小［4］。1.3.2测量大蒜素的最小抑菌浓度(MIC)采用液体稀释法，制备含不同浓度的大蒜素MH肉汤培养液，然后向各浓度的肉汤中加入实验菌悬液并混匀，于37£培养24h后，观察其是否有菌落生长，细菌不生长的最高稀释度为大蒜素的最低杀菌浓度。1.3.3SDS-PAGE电泳试验配制10%的聚丙烯酰胺凝胶［5］,将1.3.2中含大蒜素的菌体及空白对照与等体积上样缓冲液混合后，经沸水浴5mins,与10000r/min离心lmin,取上清上样，每孔30U1,进行电泳。然后用考马斯亮蓝染色

7、液染色3h,再脱色，观察结果。2结果2.1表1大蒜素对福氏痢疾志贺菌的抑菌情况3结论3.1大蒜素对痢疾杆菌的抑菌作用用K-B法初步检测大蒜素对痢疾杆菌是否有作用，从表1中可以看出大蒜素对痢疾杆菌有一定的抑菌作用，其抑菌环直径为15.3±1.676305mm。3.2测量大蒜素的最小抑菌浓度(MIC)用液体稀释法检测大蒜素对痢疾杆菌的最小抑菌浓度应该为100ug/ml3.3对最小抑菌浓度的培养物和没有加药的阴性对照进行的SDS-PAGE可以看出在2-105kD中间有几条蛋白条带有缺失或者降低的情况，说明药物可能作用

8、于该位置上，从而干扰细菌的增殖。4讨论目前，关于菌痢的确切发病机制尚未明确，国外学者研究认为，痢疾杆菌的感染可能包括以下过程［6-8］：k痢疾杆菌通过微皱褶细胞进入结肠粘膜，Sansonetti等［9］发现具黏附性而无侵袭性的痢疾杆菌变异株：BS15感染后，M细胞伸展似一大口袋装，其内含有大量的单核细胞；2、定植的巨噬细胞吞噬痢疾杆菌后发生凋亡，释放炎症因子，H订b订等［10］发现LP