喉癌细胞株hep-2中叶酸受体表达的实验研究

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1、喉癌细胞株HEP-2中叶酸受体表达的实验研究陈燕1熊正宁1陈鸿雁2(1荣县人民医院四川荣县643100；2重庆医科大学附属第一医院400016)【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672・5085(2013)26・0220・02【摘要】目的探讨喉癌细胞株HEP-2中叶酸受体的表达情况。方法以PBS液作为空白对照，采用免疫组化法对分别检测α型叶酸受体及β型叶酸受体在喉癌细胞株HEP・2中的表达情况。结果喉癌细胞株HEP・2特异性高水平的表达α型叶酸受体，非β型叶酸

2、受体。结论叶酸受体有望成为治疗喉癌治疗的一个新靶点，值得进一步探索。【关键词】叶酸受体喉癌细胞株HEP・2喉癌给人类造成了重大的危害，长期以来研究怎样早期诊断及治疗喉癌一直是医学上的研究热点，除了常用的药物化疗、放射治疗和手术治疗之外，各种新的方法不断出现，如免疫疗法、光动力疗法和基因治疗法等，光动力疗法是根据吓咻衍生物的光敏特性，把它们注入体内，利用光照下产生的氧自由基IX破坏癌细胞组织，以杀死癌细胞，但存在杀伤效率较低，选择性差等问题•常用的药物疗法、放射疗法也会伤害癌细胞周围的正常细胞，造成有害影响，近年来靶向技术

3、因其能减轻对正常细胞的危害而受到广泛重视，木研究为喉癌的靶向治疗提供可能的实验依据。1材料和方法1.1材料和仪器喉癌细胞株HEP・2由木实验室常规保存。α型叶酸受体单抗(MOV-18)购于晶美生物工程有限公司,β型叶酸受体单抗获赠于日木鹿儿大学，SP-9000免疫组化试剂盒购于北京中杉牛物有限公司。1.2实验方法细胞的复苏：从液氮罐中取出冻存管，置于37°C水浴箱中，轻轻摇动使细胞在lmin内解冻。将细胞悬液转入离心管中，加入6mlRPMI-1640培养基，离心800rpm/min后去上清。加入2m

4、lRPMI-1640培养基重悬细胞，转入培养瓶中，另加入6mlRPMI-1640培养基置C02孵箱中培养。细胞培养：喉癌细胞株HEP・2用含10%新生小牛血清RPMI-1640培养基培养，于37°C、含有5%CO2培养箱中培养传代，选用对数生长期细胞实验。免疫组化染色：将喉癌细胞爬片固定，热修复处理后，以PBS液代替一抗作为空白对照组，分别以α型叶酸受体及β型叶酸受体单抗作为一抗进行细胞免疫组化染色(SP)法，具体方案参照SP-9000型试剂盒说明书。1.3结果判断标准[1]以细胞膜上呈现棕黄色染色

5、为阳性结果，强阳性为阳性率>90%?阳性为50%・90%,弱阳性为10%・50%,阴性者<10%；以阳性积分光密度(OD)除以面积，取平均值间接反应该标本FRs表达阳性率情况。2结果细胞免疫组化染色结果显示，MOV-18组(α・FR组)喉癌细胞膜上均呈现棕黄色染色(见下图)，阳性率90%,为强阳性(>75%),β型叶酸受体单抗组及空白对照组无着色。说明喉癌细胞膜上高水平表达α-FRo3讨论本实验研究发现:喉癌细胞株HEP・2细胞膜上表达α型叶酸受体，表达的阳

6、性率90%,而不表达β型叶酸受体，说明喉癌细胞株HEP・2中特异性的表达α型叶酸受体。在头颈肿瘤中，AntonyAc⑵等发现，叶酸受体定位于llql3.3-14.1,此位点邻近Int2,而Int2位点为大鼠乳腺肿瘤的病毒螯合位点的人类同源系列。WeitmanSD等⑶发现，叶酸受体编码区域在20%的头颈肿瘤中有扩增。此外，该基因是Bcl-1易位基因t(ll;14)(ql3;q32)的一个重要位点。此位点包括编码几种生长因子•可能还有细胞周期蛋白的基因•这些基因的表达可能是细胞的转化有关。说明叶酸受体与

7、头颈肿瘤的发生有一定的关系。众所周知，在生理条件下，人体内所需的叶酸必须从外界环境中摄取，而叶酸末端的两个竣基是很难自由通过细胞膜的，为绕过这个屏障，生物体引入了两种机制，一是利用低亲和力的跨膜蛋H直接将叶酸转入胞浆，另一种就是通过高亲和力的糖蛋白受体，即是叶酸受体,通过细胞的内吞作用，将叶酸以氧化物的形式转入细胞内，也是介导叶酸进入细胞的主要途径。首先，叶酸与其靶细胞特异的膜表面受体结合，并富集在靶细胞特定区域（包涵体有衣小凹处），该区域向胞浆内陷形成胞内体，在酸性（PH5.0〜5.5）胞内体中受体与配体分离，受体返冋

8、细胞膜表面，而内化的配体或被溶酶体降解，或由此释放入胞液。而叶酸可被还原为四氢叶酸，后者是-•碳单位的辅酶，参与一碳单位代谢和卩票吟及胸腺卩密噪的从头合成，当叶酸受体高水平表达的吋候,核昔酸的从头合成加快，导致肿瘤细胞的分裂加快，从而加速了肿瘤的发生，发展。利用抗叶酸受体的抗体与叶酸竞争性的结合,阻断叶酸受体将叶酸或