食管癌叶酸受体α表达水平的研究

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1、汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要目的：检测人食管癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜组织及人类食管癌细胞株(EC109)中叶酸受体α(FOLR1)基因表达水平，比较它们之间FOLR1基因表达水平的差异。分析食管癌叶酸受体α的表达水平与吸烟、酗酒、不良饮食行为和食管癌临床病理特征之间的相关性。方法：收集2006年10月至2007年5月期间在汕头大学医学院第一附属医院胸外科确诊为食管癌并手术切除的病例40例，取其癌组织和癌旁组织；同期收集食管癌细胞株EC109、人外周血淋巴细胞、胃镜下钳取正常食管粘膜组织5例作为对照；检测其叶酸受体α(FOLR1)基因表达情况。1）收集培养于

2、不含叶酸的RPMI1640的EC109细胞株，经异硫氰酸荧光素标记的叶酸(FA-FITC)染色后，用流式细胞分析仪检测阳性细胞百分比和荧光强度。2）从活体切下食管癌后，立即从标本剪取食管癌组织及离癌灶边缘2cm以上，5cm以内的癌旁组织，分别制备单细胞悬液，经异硫氰酸荧光素标记的叶酸(FA-FITC)染色后，用流式细胞分析仪检测阳性细胞百分比和荧光强度。3）应用免疫组织化学(IHC)二步法检测食管癌组织、癌旁组织和EC109细胞中叶酸受体α表达阳性率。4）40例新鲜食管癌及癌旁组织、5例正常食管粘膜组织、EC109细胞株和人外周血淋巴细胞分别经RNAisoReagen

3、t液提取总RNA，逆转录为cDNA后，进行实时定量聚合酶链式反应，对FOLR1表达水平行相对定量分析。结果：1）流式细胞分析仪检测：40例食管癌病例中，我们仅取10例标本制备单细胞悬液行FA-FITC染色，结果显示癌组织单细胞悬液FA-FITC染色阳性细胞百分率0.21（0.37）较癌旁组织单细胞悬液阳性细胞百分率0.37（0.82）低，两者差异有统计学意义（P=0.038，I汕头大学医学院硕士学位论文＜0.05）。食管癌细胞株EC109叶酸受体α阳性表达率为98.7％。2）免疫组织化学法检测：40例病例中，食管癌组织80％未见FRα表达，20％呈可疑阳性（±）；癌旁

4、组织40％未见FRα表达，50％呈可疑阳性（±），10％呈阳性表达（+），两者差异有显著统计学意义（P=0.000，＜0.01）。3)RealTimeRT-PCR相对定量分析：以人外周血淋巴细胞为基准FOLR1相对表达量为1.00，癌组织FOLR1相对表达量为1.03（4.63），癌旁组织为35.66（315.44），正常食管粘膜组织为54.15（566.67）；提示食管癌组织低表达FOLR1，癌组织与癌旁组织、正常食管粘膜组织相比较，差异均有显著的统计学意义（P＝0.000,<0.01）；而癌旁组织与正常食管粘膜组织中分别不同程度表达FOLR1，但两者差异无统计学意

5、义（P＝0.263,>0.05）。4)经RealTimeRT-PCR相对定量分析：年龄≥60岁、肿瘤直径≥5cm、肿瘤浸润至食管全层、有淋巴结转移者，食管癌组织FOLR1基因表达量高于年龄＜60岁、肿瘤直径＜5cm、肿瘤浸润程度浅、淋巴结转移阴性者，但差别无统计学意义（P＞0.05）。食管癌组织中FOLR1基因表达量与患者性别、肿瘤病理类型、病变部位无关（P＞0.05）。年龄＜60岁的癌组织较癌旁组织FRα表达降低程度相对于年龄≥60岁者更为明显，两组的NFR（癌组织mRNA的FRαα表达量以癌旁组织的N倍表示）的差异有显著性意义（P＝0.001,＜0.01）。NFR

6、α与食管癌病变部位、病理类型、TNM分期、肿瘤大小、浸润深度、有无淋巴结转移均无明显相关性（P＞0.05）。5）三种行为危险因素（吸烟、酗酒和过冷过热过快饮食习惯）与FOLR1的表达水平无统计学差异（P＞0.05）。6）食管癌患者ABO血型与FOLR1的表达无明显相关性（P>0.05）。结论：1）食管癌组织、癌旁组织及食管癌细胞株EC109均有不同程度的叶酸受体α表达，且均具有结合叶酸的能力。2）检测癌组织、癌旁组织中叶酸受体α的表达水平对判断食管癌肿瘤病变范围和指导确定手术治疗范围具有一定意义。3）FOLR1基因在食管癌组织中的表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸

7、润程度、病理类型等各临床病理参数无显著相关性。4）吸烟、酗酒和过冷过热过快饮食习惯对患者食管癌组织中FRα表达水平无明显影II汕头大学医学院硕士学位论文响。5）ABO血型对叶酸受体α在食管癌组织中的表达水平无明显影响。关键词叶酸受体α；食管肿瘤；实时定量逆转录聚合酶链反应；免疫组织化学；流式细胞分析技术III汕头大学医学院硕士学位论文ResearchontheexpressionleveloffolatereceptoralphainesophagealcarcinomaPostgraduateLiuXuanzhiSupervisorGuoGuang