人源肠内菌转化通脉方化学探究

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1、人源肠内菌转化通脉方化学探究［摘要］研究人源肠内菌转化'‘通脉方”的化学成分。采用硅胶、SephadexLH-20、半制备性高效液相等柱色谱和重结晶等方法进行分离纯化，根据MS和NMR等谱学数据鉴定化合物的结构。分离鉴定了26个化合物，分别为苯丙酸（1）、6〃-0-乙酰基葛根素（2）、芒柄花素（3）、大豆昔元（4）、对務基苯丙酸（5）、呵噪-3-丙酸（6）、染料木素（7）、异芒柄花素（8）、异芒柄花昔（9）、（-）-野葛醇B-2〃-0-毗喃葡萄糖昔（10a）和（+）-野葛醇B-2〃-0-毗喃葡萄糖昔（10b）混合物、8-释基大豆昔元（11）、野葛醇A（12）、3’-甲

2、氧基-6〃-0-乙酰基葛根素（13）、6〃-0-乙酰基大豆昔（14）、3’-甲氧基大豆昔（15）、野葛醇B（16）、3-甲基尿囉唳（17）、染料木昔（18）、大豆昔（19）、3’-甲氧基葛根素（20）、葛根素芹菜糖昔（21）、獐芽菜苦昔（22）、大豆昔元-7,4'-0-双葡萄糖昔（23）、腺瞟吟（24）、3’-强基葛根素（25）和葛根素（26）。“通脉方”经人源肠内菌生物转化，所含昔类化合物被转化为昔元和/或少糖基化合物，亦包括務基化反应和脱甲基反应；昔类化合物是“前药”o［关键词］通脉方；人源肠内菌；异黄酮；葛根素；大豆昔元；“前药“通脉方”由葛根、丹参和川苇等3味

3、中药按重量比1：1：1组成，《中华人民共和国卫生部药品标准》•《中药成方制剂》收载的制剂有“通脉冲剂”[1]和'‘通脉口服液”[2]。国家食品药品监督管理局（SFDA）批准的“通脉颗粒”新药畅销市场，获批生产的药企有100余家。“通脉方”具有活血通脉之功效，用于缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛等。为将其二次开发为精制"通脉颗粒”，本课题组首先对由原生药组成的“通脉方”的物质基础进行了研究，分离鉴定了34个化合物[3-4]o鉴于口服中药的某些化学成分在肠内可能由肠内菌进行生物转化，然后吸收进入体循环发挥生物学作用[5-7],本文采用人源肠内菌

4、生物转化模型[7]对与前期研究[3-4]同批次的“通脉方”进行生物转化，并研究转化产物的化学成分，为其药效物质基础的确定和其质量标准的制定提供实验依据。1材料1.1药品与试剂人源肠内菌丛培养基材料主要为胰蛋白月东、牛肉膏、牛肝浸出粉、消化血清粉、阮豚和L-半胱氨酸盐酸盐（北京双旋微生物培养基制品厂），酵母浸膏购自UnipathLtd.（Balingstoke,Hampshire,England）,硫代乙醇酸钠（广西新港化工厂），可溶性淀粉（成都宏博有限公司），葡萄糖（北京化工厂）。葛根、丹参和川苇药材（由神威药业有限公司提供）经北京大学药学院杨秀伟教授鉴定，分别为豆科

5、植物野葛Puerarialobata（Willd.）Ohwi的干燥根、唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根茎、伞形科植物川苇LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎，凭证标本存放于北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室。薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂产品），反相C18硅胶板（Merck,Darmstadt,Germany）,聚酰胺薄膜和柱色谱聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产），柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂产品）,SephadexLH~20（Pharmacia,FineChemicals,Inc.,

6、Piscataway,N・J.,USA）,AB-8大孔吸附树脂（天津市海光化工有限公司产品）。乙醇、甲醇、环己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、石油瞇、丙酮等分析纯试剂均购于北京化工厂；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈基团有限公司），用前过0.45uni有机微孔滤膜。薄层色谱检识用10%浓硫酸乙醇溶液和10%AlC13乙醇溶液为喷雾剂，在紫外灯254,365nm波长下观察。1.2仪器BrukerAVANCEIII400型超导核磁共振波谱仪（BrukerBioSpinAGFacilities,Fllanden,Switzerland）；1H-NMR,400MHz；13C-NMR,

7、100MHz；四甲基硅烷为内标。ESI-T0F-MS用MDSSCIEXAPIQSTAR型质谱仪（AppliedBiosystems/MDSSciex・，FosterCity，CA,USA）测定；EI-MS用FinniganTRACE2000型质谱仪（ThermoFinnigan,SanJose,CA,USA）测定。半制备型高效液相色谱仪，配置P3050泵，UV3000紫外-可见光检测器，CXTH-3000X作站；DaisogelC18色谱柱（30mmX250mm,10um；北京创新通恒科技有限公司）o1029厌氧操作系统（ThermoScientif