乌司他丁多次给药对延迟心肺复苏大鼠海马谷氨酸含量干预作用

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1、乌司他丁多次给药对延迟心肺复苏大鼠海马谷氨酸含量干预作用DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.06.012基金项目：广东省天普研究基金资助课题（01201040）作者单位：832002新疆石河子，石河子大学（姜银松,方❷琦）；兰州军区乌鲁木齐总医院ICU（李新宇）；滨州医学院烟台附属医院急诊科（王占青）通信作者：李新宇，Ema订：13899803966@163.com心肺复苏成功率不断提高［1-2］,但自主循环恢复（ROSC）后脑复苏质量却不尽人意，心肺复苏的关键取

2、决于脑功能的恢复［3-5］o王姗姗等［6］研究表明乌司他丁（UTI）对心肺复苏后大鼠脑功能的预后有益，但目前动物实验多于心脏骤停（CA）后即刻进行心肺复苏（CPR）,而患者心脏骤停到实施CPR常需几分钟甚至更长时间；为更接近临床，本实验在大鼠心脏骤停后3min进行延迟CPR,在ROSC后连续两次给予UTI干预，探讨UTI对延迟复苏大鼠海马的保护作用及机制。1材料与方法1.1动物、仪器、试剂健康Sprague-Dawley雄性大鼠110只，8〜9周龄，体质量350〜450g,购自新疆维吾尔自治区疾病控制中

3、心动物研究所，饲养于兰州军区乌鲁木齐总医院动物实验科SPF级动物房；MP50多参数监护仪（德国飞利浦）；HX-200S动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；milli-Q超低有机物超纯水机制备超纯水（美国Millipore公司）；分析天平（Sartorius,BS110S,d=0.1mg）；高效液相色谱仪（美国Waters）；戊巴比妥钠（上海化学试剂厂）；注射用乌司他丁（广东天普生化医药有限公司，批号：H19990134）；谷氨酸标准品（中国计量科学研究院）；AccQ-Fluor氨基酸衍生试剂盒（美国Wa

4、ters公司）。1.2实验方法1.2.1分组随机数字表法将大鼠分为假手术对照组（S组，n=35）：行麻醉、气管插管及血管穿刺；乌司他丁复苏组（UTI组，n=35）：窒息后常规复苏，ROSC后2min内和1.5h经由股静脉推注乌司他丁（10万U/kg）；生理盐水复苏组（NS组，n=35）：ROSC后相同时间推注等剂量生理盐水。复苏组分为ROSC后0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、4h、6h7个亚组，S组气管插管、血管穿刺后同上相同时间点分7个亚组，各亚组5只。1.2.2模型制作本实验参考文献［7］

5、并加以改进。大鼠称质量，3%戊巴比妥钠（35mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧固定。正中切口，暴露气管，行气管插管。沿腹股沟暴露双侧股动脉鞘，剥离左侧股静脉、右侧股动脉，分别结扎血管远心端，24G套管针向近心端穿刺置管后固定，肝素化(500U/kg)o连接压力换能器，连接心电肢体导联，至监护仪正常显示股动脉平均动脉压、心电图。伤口处敷蘸生理盐水纱布。稳定10min后，呼气末气管夹闭诱导窒息(5±1)min致CA,继续延迟3min[自夹闭气管时计起为(8±1)min]方行常规复苏：开放气道，接小动物呼吸机(呼

6、吸频率80次/min,潮气量6mL/min),于剑突处胸外按压(频率160次/min),同时经股静脉推注肾上腺素20ng/kg,观察心电图及平均动脉压变化，R0SC后2min.1.5h分别给予UTI组推注乌司他丁，NS组推注等剂量生理盐水。1.2.3CA标准心电图呈室颤、停搏或电机械分离；股动脉平均动脉压60mmHg,持续时间超过10min；动物皮肤黏膜发纟甘明显减轻。1.2.5退出实验标准抢救时间超过2min,自主循环仍无法恢复；虽自主循环恢复，但其后仍有血压下降或心律失常需追加肾上腺素、胸外按压。1

7、.2.6药物干预及标本留取10万单位/安咅瓦乌司他丁溶于2mL的0.9%注射用生理盐水，每次推注剂量为10万U/kgoUTI组中的0.5h、1h、1.5h三个亚组在R0SC后2min内单次推注UTI,2h、2.5h、4h、6h四个亚组两次推注UTI(ROSC后2min内+ROSC1.5h),按各自设定时间点断头；NS组推注等量生理盐水，余处理同UTI组；S组按设定时间点断头。1.2.7检测方法组织学检测：低温冰台上断头剥离海马后，于4%多聚甲醛中固定24ho脱水、透明、浸蜡及包埋，海马组织5um厚度切片

8、，行HE(HemateinEosin)染色。反相-高效液相荧光检测：氨基酸对照品配制、衍生试剂配制后，进行氨基酸对照品衍生化反应、大鼠海马组织预处理及衍生化反应，直至进样5PL进行色谱分析。色谱条件为的流动相A：称取7.4g无水乙酸钠，加水930mL,溶解后用冰醋酸调pH=6.5,然后加乙惰70mL,混匀，用0.45um滤膜过滤。流动相B：甲醇：乙惰：水=20:60:20,柱温：37°CO荧光检测，激发波长235nm,发射波长395nmo流