组培过程中兜唇石斛的耐盐性研究

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1、组培过程中兜唇石斛的耐盐性研究　　摘要：以兜唇石斛试管苗为材料，研究组织培养过程中试管苗的生长状况，通过测定组织培养过程中分化苗合成的脯氨酸含量来确定兜唇石斛的耐盐性。最终得到最适合兜唇石斛试管苗生长的培养基是MS+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+2mol/L6-BA+0.6mol/LNAA；进行耐盐培养时得到脯氨酸含量最高的培养基是MS+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+2mol/L6-BA+0.6mol/LNAA+0.6%NaCl。　　关键词：兜唇石斛；耐盐性；脯氨酸　　中图分类号：S682.31文献标识码：A文章编号：0439-8114（2016）19-5095-03　

2、　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.19.051　　Abstract：TheseedlingsofDendrobiumaphyllumwereusedasmaterialstostudythepropagationandsalttoleranceinthetissueculture.ThecontentoftheprolinefromseedlingscoulddeterminesalttoleranceofDendrobiumaphyllum.Finally，themostsuitablemediumforDendrobiumaph

3、yllumseedlingstogrowwas：MS+20g/LD（+）-Sucrose+6.5g/LAgar+2mol/L6-BA+0.6mol/LNAA.Salttoleranceculturemedium：MS+20g/LD（+）-Sucrose+6.5g/LAgar+2mol/L6-BA+0.6mol/LNAA+0.6%NaCl.　　Keywords：Dendrobiumaphyllum；salttolerance；proline8　　兜唇石斛（Dendrobiumaphyllum）属于兰科（Orchidaceae）植物，分布于中国长江以南（广西、云南、贵州）、尼泊尔、

4、锡金、不丹、印度东北部至中南半岛和马来西亚[1]；别名无叶石斛大光节、水草石斛，生长在400～1500m的疏林树干上或山谷岩石上[2]。　　兜唇石斛有重要的观赏价值和较高的药用价值。近年来，由于兰花爱好者收藏数量增加、森林砍伐严重、药用开发过多等因素，自然界中石斛蕴藏量逐年减少[3]。且石斛生长速度缓慢，繁殖率低，许多优良品种无法大量繁殖以满足日益增长的市场需求。针对这一问题，利用组织培养技术可以扩大石斛兰生产规模。目前生产上多利用设施农业通过温室栽培培养大量石斛，而温室的环境相对封闭，室内的温度较高，导致基质水分大量蒸发，盐分含量增高，不利于兜唇石斛生长发育。虽然兜唇石斛已经

5、成为市场流通品种，但是目前大多数学者研究了其的化学成分[4]和多糖含量[5]等，其耐盐性方面相关的研究尚未见报道。因此，本试验通过测定不同NaCl浓度下兜唇石斛组培苗叶片中脯氨酸的含量，研究组培过程中兜唇石斛的耐盐性，为石斛抗逆栽培和抗性育种研究提供科学依据。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　试验材料为兜唇石斛试管苗，取自天津农学院农学与资源环境学院植物细胞工程研究中心。　　1.2试验方法　　1.2.1兜唇石斛的培养①筛选最适培养基。取兜唇石斛种苗接种于新的培养基中，培养基配方为MS+20g/L蔗糖+6.58g/L琼脂+6-BA+NAA。如表1所示，将6-BA和NAA浓度分

6、别设定4个梯度，6-BA的梯度为0、1、2、3mol/L，NAA的梯度为0、0.2、0.4、0.6mol/L。一共16组配比，每组重复5次，找出兜唇石斛试管苗生长所需的最适培养基。②种苗的扩繁。兜唇石斛的培养过程中，依据兜唇石斛的生长长势得到兜唇石斛最适培养基配方，作为种苗扩繁培养基。为保证种苗耐盐培养所需要的种苗数，共培养65瓶，每瓶接种3个种苗。　　1.2.2兜唇石斛的耐盐培养①兜唇石斛种苗的耐盐培养。在兜唇石斛最适培养基MS+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+2mol/L6-BA+0.6mol/LNAA的基础上加入12个浓度梯度的NaCl，分别为0.0%、0.1%、0.2

7、%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.1%，配制成耐盐培养基。将扩繁的无菌兜唇石斛种苗接种到耐盐培养基中，每个浓度重复5次。②兜唇石斛种苗的耐盐性测定。首先，制作脯氨酸标准曲线。按照脯氨酸含量的测定方法[6，7]，以脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。其线性回归方程为：y=0.0236x+0.0013（R2=0.9882）。其次，样品测定。称取叶片0.5g放到具塞试管中（3次重复），加入5mL3%的5-磺基水杨酸溶液，沸水浴10m