青藏高原有机牦牛背最长肌肌肉的差异蛋白质组学

《青藏高原有机牦牛背最长肌肌肉的差异蛋白质组学》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、青藏高原有机牦牛背最长肌肌肉的差异蛋白质组学　　摘要：以青藏高原有机牦牛为研究对象，采用超声波破碎法提取生鲜和冷藏有机牦牛背最长肌肌肉蛋白，Bradford法进行蛋白质定量后，进行双向电泳，通过PDQuest凝胶图像分析软件筛选3倍或3倍以上的差异斑点进行基质辅助激光解析串联飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflighttotimeoffight，MALDI-TOF-TOF），并用Mascot软件鉴定差异蛋白，以建立青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异蛋白质组学

2、研究方法。结果表明：经双向电泳图谱分析所获得的青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷鲜肉背最长肌肌肉蛋白斑点数分别为1840±181和2034±86，分布于pH3.0～10.0之间，PDQuest软件筛选青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异3倍或3倍以上蛋白质斑点36个，其中生鲜肉相比冷藏肉有机牦牛背最长肌肌肉蛋白上调的有12个点，下调的有24个点，质谱鉴定有意义的差异蛋白质点7个（蛋白质得分>65）（P<0.05），其中2种蛋白质表达量上调，5种蛋白质表达量下调。　　关键词：有机牦牛；背最长肌；冷藏肉；生鲜肉；蛋白质组学9　　肉类产品食用品质的

3、大幅下降引发了人们对现代肉品品质及其评价标准的深入思考，寻找一种科学的肉品品质评价方法并对其品质进行控制已成为国内外研究的热点。肉品品质的形成机理与肉质性状高度相关，而几乎所有的肉质性状都受到复杂的基因和蛋白质调控。已有的研究主要集中在对猪肉等肉质进行感官、理化特性和组织学特性的评价，尚未见到应用差异蛋白质组学方法对青藏高原有机牦牛宰后生鲜肉及冷藏肉品质的形成机理、评价和控制进行研究的报道。　　本研究以同一饲养环境和屠宰条件，宰后以不同贮藏温度（4、18℃）、不同贮藏时间（0、24h）的生鲜和冷藏有机牦牛肉作为研究对象，以差异蛋白质组学技术

4、为研究平台，筛选与分析生鲜和冷藏的有机牦牛背最长肌肌肉的差异蛋白质，为进一步探讨有机牦牛肌肉加工过程蛋白质的降解规律提供参考。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　青藏高原有机牦牛背最长肌肌肉组织取自青海省河南县有机牦牛背最长肌（第七根胸椎到最后一根胸椎），保存备用。　　2D裂解液、蛋白质定量试剂盒、IPG缓冲液美国Bio-Rad公司；尿素、硫脲、3-[（3-胆酰胺丙基）-二乙胺]-1-丙磺酸（3-（3-cholamidopropyl）dimethylammoniopropanesulfonicacid，CHAPS）、二硫苏糖醇（dith

5、iothreitol，DTT）、Tris-HCl、甘油、碘乙酰胺、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、甘氨酸美国Sigma公司；　　其余试剂为国产分析纯。　　1.2仪器与设备　　双向凝胶电泳系统、固相pH梯度（immobilizedpHgradient，IPG）干胶条、ImageMaster2DPlatinum凝胶成像系统美国GE公司；PDQuest软件美国9　　Bio-Rad公司；5800基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪（matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflighttotimeoffig

6、ht，MALDI-TOF-TOF）美国ABSCIEX公司。　　1.3方法　　1.3.1样品制备　　生鲜（宰后18℃、0h）和冷藏（宰后4℃、24h）有机牦牛背最长肌肌肉样品每份取约0.5g，加入1mL2D裂解液，匀浆（4m/s、匀浆15s、停顿2min），匀浆间隙放于冰上冷却，重复操作3次[1]。再对匀浆液进行冰浴超声破碎（100W、超声10s、间歇15s），重复操作10次，13400r/min条件下离心15min，取上清液。　　1.3.2蛋白质定量　　采用Bradford法进行蛋白质定量，于-80℃保存备用。　　1.3.3双向电泳　　取总

7、蛋白提取物100μg，上样量为450μL，pH3～10非线性IPG胶条17cm进行等电聚焦电泳，条件为：30V、12h，500V、1h，1000V、1h，8000V、8h，500V、4h。等电聚焦结束后采用12.5%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectropheresis，SDS-PAGE）胶进行垂直电泳，条件为：15mA/胶、30min，30mA/胶至溴酚蓝离胶下沿0.5cm。垂直电泳结束采用银染法进行凝胶染色。　　1.3.4图像采集　　采用ImageMas

8、ter2D9Platinum凝胶成像系统对凝胶进行灰度扫描。所获得扫描图像通过PDQuest分析软件进行差异蛋白质组分析。　　1.3.5质谱分析及蛋白质数据库检索　　采用5800