菜豆植物凝集素对肿瘤细胞增殖的抑制作用

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1、菜豆植物凝集素对肿瘤细胞增殖的抑制作用　　摘要从已测定凝集素含量的56个菜豆品种中筛选具有代表性的菜豆品种，分离纯化菜豆植物凝集素，MTS法分析其对人乳腺癌细胞（MCF7、231）及肝癌细胞（HEPG2）生长的影响。结果显示菜豆植物凝集素能抑制这三种肿瘤细胞的增殖，且抑制作用呈明显剂量-效应关系。说明菜豆植物凝集素具有一定的体外抗肿瘤活性，可进一步筛选高凝集素含量菜豆品种作为分离纯化凝集素的原料，为抗肿瘤药物的研究奠定实验基础。　　关键词菜豆植物凝集素MTS分析抗肿瘤　　中图分类号：Q946文献标识码：ADOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2

2、016.09.079　　AnalysisonInhibitionofTumorCellProliferation　　InducedbyKidneyBeanLectin　　JINWenyan，WEISiyu，LIJianan　　DepartmentofBiotechnology，SchoolofLifeScience，JianghanUniversity，Wuhan，Hubei430056）　　AbstractThekidneybeanlectinwaspurifiedbymethodsofhomogenization，centrifugation，ultra

3、filtrationandammoniumsulfateprecipitation.Twohumanbreastcancercellline（MCF7，231）andonelivercancercellline（HEPG2）wereculturedinvitroandtreatedwithkidneybeanlectin.MTSassaywasusedfordetecting6theinhibitionoftumorcellproliferation.Theresultsshowedthattherewasasignificantdifferenceinth

4、einhibitionratioofproliferationaftertreatedbykidneybeanlectin.Theresultalsoindicatedthattheinhibitionwasdosedependent.Thisstudywillprovideatheoreticalbasisandtechnicalmethodsforthegeneticimprovementofkidneybeanqualityandutilization.　　Keywordskidneybeanlectin；MTSassay；anti-tumor　　凝集

5、素是一种可从植物、无脊椎动物和高等动物中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故称其为凝集素。有报道指出，某些凝集素在动物体内对各类肿瘤均有抑制作用；另有报道，从刀豆种子中提取的一种新型凝集素具有潜在的抗肝癌作用。多种研究表明存在于植物中的凝集素具有抑制肿瘤细胞增殖活性。　　在前期研究中，我们已经对56个品种的菜豆植物凝集素进行活性浓度测定，并成功分离纯化到菜豆植物凝集素，本研究拟通过MTS法检测已分离的菜豆植物凝集素对三种肿瘤细胞生长的影响，判断其是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，为菜豆植物凝集素的应用奠定基础。　　1材料与方法　　1.

6、1细胞株　　人乳腺癌细胞（MCF7），人肝癌细胞（HEPG2），人乳腺癌细胞株（231）。　　1.2试剂6　　菜豆植物凝集素（1mg/ml），RPMI-1640培养基，胎牛血清，青、链霉素（1%），RPMI-1640完全培养液（RPMI-1640+10%胎牛血清+1%青、链霉素）。　　1.3方法　　1.3.1肿瘤细胞培养　　三种贴壁细胞使用RPMI-1640完全培养液，于37.0??C、5%CO2培养箱中培养。细胞贴壁生长，取对数生长期细胞用于实验。　　1.3.2MTS法检测活细胞数　　将用以上方法培养获得的细胞以2.0x104个/ml密度接种于96孔培养板

7、中，每孔0.1ml，于37.0??C、5%CO2培养箱中培养24h后，加入浓度分别为1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.0001mg/ml、0.00001mg/ml的菜豆凝集素0.1ml。每个浓度设3个重复，并设空白对照。继续培养24h后，加入MTS试剂，放回培养箱3～4h，在波长490nm处测得各孔吸光值，计算细胞生长抑制率=（空白对照组A490-实验组A490）/空白对照组A490*100%。　　1.4统计学分析　　利用EXCEL软件，将吸光值与其相应的菜豆凝集素浓度制成统计图进行分析。　　2结果6　　形态观察结

8、果显示，人乳腺癌细胞（MCF7），人肝癌细胞（HEP