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1、淡水沙梨离体叶片愈伤组织诱导技术曾令达黄郁敏徐春香李彩华惠州学院生命科学院惠州学院生物技术研究所华南农业大学园艺学院摘要：以淡水沙梨离体叶片为外植体，以MS和White培养基为基本培养基，研究了不同浓度6-BA.NAA等植物生长调节剂及不同接种方式对淡水沙梨继代培养离体叶片的影响。结果表明:MS和White培养基中淡水沙梨的叶片愈伤组织诱导率分别为72.4%和30.9%,叶片最佳愈伤组织诱导配方为MS+6-BA1.Omg-Ll+NAA0.2mg•I/1,20d叶龄叶片愈伤组织诱导率为100.0%,40d叶龄叶片愈伤
2、组织诱导率为60.0%,叶片远轴面平贴愈伤组织诱导率为100.0%,叶片近轴面平贴、叶片直插时愈伤组织诱导率分别为7&3%和50.0%o淡水沙梨离体叶片培养中MS培养基较White利于愈伤组织诱导，叶龄较小进行培养愈伤组织诱导率较高，叶片远轴面平贴的接种方式更适合于叶片的离体培养。关键词：淡水沙梨;离体叶片;愈伤组织;培养基;作者简介：曾令达(1974-),男，博士，副教授，研究方向为植物生理生态和生物技术。E-mail:hzlingda@139.com.收稿日期:2017-07-10基金：国家自然科学基金资助项目
3、(31272117)CalliInduetionTechniquesofDanshuiPearLeafinvitroZENGLingdaHUANGYuminXUChunxiangLICaihuaDepartmentofLifeScience,HuizhouUniversity;CollegeofHorticulture,SouthChirmAgricultureUniversity;Abstract：LeafofDanshuipearwasusedasexplant,MSandWhitemediumasthebas
4、icmedium,theplantgrowthregulator6~BAandNAAanddifferentinoculationmethodswerestudiedtoobtaincallusofDanshuipear.TheresuItsshowedthatleafcallusinductionrateoftheDanshuipearinMSandWhiteculturemediumwere72.4%and30.9%,thebestcallusinductionformulawasMS+6-BA1.0mg•L*
5、+NAA0.2mg•L20daysleavesthehighestcallusinductionratewas100.0%,40days1eavesthehighestcallusinduetionratewas60.0%,abaxialsurfaceofflatleafcallusinduetionratewas100.0%,theadaxialflatrateofcallusinduetionwas78.3%,whenthelineofleafcallusinductionratewas50.0%.Theser
6、esuItsindicatethatMSmediumwasbetterthanWhitemediumforleafcalliinduction,younger1eaveshadhighercallusinitiationrates,1eafabaxialsideincontactwiththemediumwasmoresuitableforinducingleafcallusinvitro.Keyword：Danshuipenr;lenfinvitro;cnllus;culturemediuni;Received：
7、2017-07-10淡水沙梨是以地方名命名的著名沙梨种，原产在惠州市惠阳区淡水。目前，淡水沙梨种植数量极少，因此有了淡水沙梨产业“已不存”的说法旦L说明淡水沙梨种质资源现状令人堪忧。叶片离体培养是构建高效稳定转基因植株的首耍基础［2-4］,梨叶片的诱导试验中，不同梨品种的叶片诱导基本培养基不尽相同，汤绍虎等回用“雪青梨”的叶片为外植体，在MS基木培养基上培养10d左右叶片就长岀愈伤组织，而付镇芳等回认为NN69培养基是“砺山酥梨”的叶片诱导最佳基本培养基。同样是以NN69培养基为基本培养基的条件下，砺山酥梨回、苹果
8、梨也、雪花梨宜和秋子梨回等不同类型梨的叶片诱导培养基配方也有差异。而且接种方式不同其愈伤组织诱导率也不同，陶爱群等［10］对“黄金梨”叶片进行研究，发现当远轴面贴培养基时，愈伤组织诱导率较高，达100%,当近轴面贴培养基吋，愈伤组织诱导率则较低，为90%。同样叶龄对愈伤组织诱导率也有影响，焦展［11］用“喜水”和“秦丰”2个梨品种以及西洋梨矮化砧木BA29的
