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《肝癌患者外周血肿瘤相关抗原mage-a1a3表达与意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、肝癌患者外周血肿瘤相关抗原MAGE-A1A3表达与意义摘要：本文通过巢式RT-PCR方法检测60例HCC患者外周血单核细胞(PBMC)中MAGE-Al,A3mRNA表达，以30例健康志愿者外周血标本作为对照组，进行MAGE-Al,A3mRNA和AFPmRNA对比检测。结果显示MAGE-A1,A3在HCC患者外周血中高表达，可联合AFP作为特异性肿瘤标记物用于肝癌患者的检测。关键词：肝癌，黑色素瘤抗原基因；巢式逆转录聚合酶链反应肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，早期发现与诊断是提高临床治愈率的有效手段。本试验釆用巢式反转录聚合酶链法检测编码肿瘤相关抗原的黑色素瘤抗原(melanomaantige
2、n,MAGE)MAGE-A1和MAGE-A3基因在HCC外周血中的表达，并对检测结果的临床意义进行了初步探讨。1资料与方法1.1一般资料实验组为2011年1月~2013年6月沈阳市第四人民医院肝胆外科收治的HCC患者60例,伴有乙型肝炎病毒阳性46例。男女比例为2:3,年龄38〜72岁，平均56.3岁。患者均行手术完整切除病灶,并经术后病理证实。30例健康志愿者外周血标本作为对照组，男22例，女8例，年龄32〜45岁，平均37.4岁。外周血标本的采集HCC癌患者外周血(10ml)在术前Id采集。对照组血标本择期采集。使用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)o引物:
3、根据Genbank数据库中所查MAGE-AbA3基因序列,使用Omiga2软件设计引物。试剂:Trizol试剂购自美国Gibco公司，脱氧核昔酸(dNTPs)购自Pharmacia公司RNA逆转录酶(MMLV)和TaqDNA聚合酶购自Promega公司。1.2方法121总RNA提取取1X107个PBMC加入Trizol试剂lml裂解，经三氯甲烷分层、异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤干燥后，将所得RNA溶于无RNA酶的纯水中，采用紫外分光光度计(Beckman公司.1DU640)对其定量后再进行cDNA合成和RNA电泳。122cDNA合成反应体系及反应条件为:MgC124卩L,10XBuffer2
4、uL,dNTP2uL,Oligo(dT)luL,RNasin0.5PL,AMV酶5PL,Template4uL,加无RNA酶的双蒸水补足20PLo42°C孵育30min,95°C灭活酶活性5min,-20°C冻存备用。1.2.3NestedRT-PCR反应体系为:MgC123uL,10XBuffer5uL,dNTPluL,引sense1uLo引物antisense1uL。Taq聚合酶0.5uL,cDNA5uL,加无RNA酶的双蒸水补足50uLo以MAGE-A1,A3,AFPmRNA为靶基因时，PCR循环条件参照文献[1,2]0终产物分别在2.0%琼脂糖凝胶上电泳，紫外灯下观察DNA条带，凝
5、胶成像分析仪照相。1.3统计学方法使用SPSS10.0软件建立数据库,使用x2检验和四格表确切概率法。2结果2.1MAGE-A1,A3mRNA在HCC患者外周血中的表达情况RT-PCR电泳显示：所有内参照均为阳性。健康者外周血中未检测到MAGE-A1,A3mRNA的表达。60例HCC患者癌组织中MAGE-AlmRNA表达的阳性率为38.0%(23/60),MAGE-A3mRNA表达的阳性率为48.3%(29/60),AFPmRNA表达的阳性率为73.3%(44/60)均高于癌旁组织(0%)(P0.05)；与肿瘤大小及AFP水平存在相关性(P
