磷酸酶与糖苷酶在alzheimer神经原纤维缠结中临床探究

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1、磷酸酶与糖昔酶在Alzheimer神经原纤维缠结中临床探究【中图分类号】R749.1【文献标识码】B【文章编号】1005-0019(2013)12-0392-01系统性红斑狼疮的病因及发病机理不清，并非单一因素引起，可能与遗传、环境、性激素及免疫等多种因素有关。通常认为具有遗传背景的个体在环境、性激素及感染等因素的共同作用或参与下引起机体免疫功能异常、诱导T、B细胞活化、自身抗体产生、免疫复合物形成及其在各组织的沉积，导致系统性红斑狼疮的发生和进展。系统性红斑狼疮(SLE)的主要病理改变是免疫复合物造成的器官和组织损伤。自身抗原特异性辅助性T细胞(Th)在病理

2、性自身抗体的形成中起重要作用。而Th细胞通过CD40-CD40L连接作用于B细胞，从而诱导B细胞活化、增殖,产生从IgM到IgG的抗体。为了研究CD40-CD40L途径在SLE中的作用，我们应用流式细胞计数仪，对10例活动期SLE、10例缓解期SLE患者及正常人外周血T细胞在抗CD3单抗刺激前后的CD40L表达进行了分析。一材料与方法1、患者：活动期SLE患者10例，平均年龄40岁，均为女性；缓解期SLE患者10例，平均年龄45岁，均为女性。所有患者均符合1982年美国风湿病学会制定的SLE分类标准。正常对照组20例，取自献血者。2、主要试剂和仪器：FITC标

3、记的抗CD40L、抗CD25抗体，TRITC标记的抗CD3单抗，正常小鼠IgG(Sigma公司)。细胞洗涤液为含2%灭活小牛血清和0.01%NaN3的PBS,0.15mol/LRBS溶解液，含0.8%戊二醛固定液的PBS。稀释液：PEG600040.0g,NaF10.0g,Na2HP04•12H20101.5g,NaH2P04-2H2010.Og,NaN31.0g,用蒸馆水溶解后加至lOOOmL,用G3玻璃滤器过滤，室温保存。流式细胞计数仪为EPICS型(美国Coulter公司产品)。3、细胞培养：患者和正常人外周血单一核细胞(PBMC)经Ficoll-Hyp

4、aque液分离，在37°C,5%C02中培养，培养基含RPMI1640,10%小牛血清，160U/mL青霉素和链霉素。1X106外周血单一核细胞(PBMC)在lmL培养基中单独或与抗CD3单抗共同孵育6h、24h、48ho4、流式细胞术分析：取50uL细胞悬液，分别加入FITC标记的抗CD40L、抗CD25单抗各20uL,在对照管中加入正常小鼠IgG20uL,混匀后置4°C30min,用PBS洗3次，弃去上清液，加固定液0.5mL,尼龙网过滤后进行流式细胞计数分析。5、应用t检验进行统计学分析。二结果1.在未经抗CD3单抗刺激时，活动期SLE患者PBMC中CD

5、40L的表达比正常对照组显著增高（P