碱性磷酸酶在临床和医学研究中的应用

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1、碱性磷酸酶在临床和医学研宄中的应用长沙医学院基础医学院湖南长沙410219【摘要】碱性磷酸酶是生化检验中的一项重要指标，广泛应用于肝胆疾病和骨发育的临床诊断。由于其独特的功能，它在蛋白质磷酸化、催化去除DNA和RNA磷酸基团、酶联免疫分析等研宄中发挥重要作用，木文对它在医学和生物学研究的应用进行了综述。【关键词】碱性磷酸酶；磷酸化；DNA测序；酶联免疫分析碱性磯酸酶（alkalinephosphatase,AP）是一个同型二聚体的磷酸单酷酶，分子量为56KDa。每个单体由449个氨基酸组成，完整的AP分子呈现典型的&a

2、Ipha;/β的拓扑结构，同时每个单体均異有一个活性中心，活性中心IX域由Aspl01-Serl02-Alal03三连体、Argl66、水分子、三个金属离子（1个镁离子和2个锌离子）及其配体氨基酸组成。磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，催化反应机制都基木相同，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。在成骨过程中水解磷酸酯，为羟基磷灰石的形成提供必要的磷酸根离子；催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷5&rSqU0;磷酸基团等。AP在医学和分子生物学

3、等领域有广泛的用途。1临床医学诊断测定血清中AP的活力己成为诊断和监测多种疾病的重要手段。我国的临床检验实验室多采用荧光检测法检测AP，其原理为以磷酸对硝基酚为底物，该底物木身易自发水解成对硝基酚，在405nm波长附近测量。AP测定是生化检测中的一项指标，在血液中的正常范围是女性50〜1351）八，男性45〜125U/L,妊娠期和儿童骨发育期会有生理性升高［1］。碱性磷酸酶来源于肝脏、肾脏、骨及其它器官，主要由胆汁排出，若过程中出现异常，那就会引起血清AP偏高，AP的含量主要用于阻塞性黄疸、肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查

4、［2,3】。临床骨型AP常用于临床上对骨发育、骨骼康复、骨质疏松、牙齿疾病的诊断［4,5］。2磷酸化蛋白质的检测蛋白质的磷酸化与去磷酸化参与调控信号转导、基因表达、细胞周期等诸多细胞过程。碱性磷酸酶用于磷酸化蛋白质组的定量和磷酸化位点的研究常用的做法是：采用多种方法进行磷酸化蛋白质(肽)富集［6］，通过质谱分析确定磷酸肽和磷酸化蛋白质，并进而确定磷酸化位点［7,8］。蛋白质磷酸化分析己经日益被应用于阐释各种细胞及生物体过程的内在机理，药物作用靶点的寻找以及疾病相关特异性标记物的发现中。3催化DNA、RNA去末端磷酸基闭

5、反应在生物化学和分子生物学方面，用AP催化除去DNA分子的5’末端磷酸基团以防止载体自连是基因克隆中的常规手段之一［9,10］。用AP脱去5’末端磷酸基闭，再用(γ-32P)ATP标记5’末端，通过32P的活性定位，可用于化学测序、RNA测序和特异性DNA或RNA片段的图谱构建。另外，应用AP代替同位素标记核苷酸探针可用于分子杂交。4酶联免疫荧光反应在免疫学研究方面，已广泛应用AP标记抗体进行酶联免疫荧光反应(EUSA)和Western印迹分析，即将AP与显色剂或去磷酸化

6、后能发光的底物相互作用来揭示靶与检测酶复合物的存在，可用作检测血液中的血红素和心肌钙蛋白等［11-12］。近年来，关于AP的生理功能及应用的报道很多，文章主要从大的方面概述了它的主要用途，随着科学的发展、科研手段的进步、对AP认识的不断深入，将使AP在科研和临床诊断中发挥更大的作用。参考文献：［1］.王迪，杨春，张晓威，金春梅，等.吉林省2〜14岁汉族儿童血清碱性磷酸酶参考区间的建立，重庆医学，2015,44(26)：3618-3621[2].陈育霞，刘树红，李明远，等.糖尿病性肝纤维化伴肝微血管病变1例，肝脏，201

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