小鼠中脑神经干细胞体外培养方法的研究

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1、小鼠中脑神经干细胞体外培养方法的研究肖莉作者简介：肖莉（1982-），女，硕士，研究方向：人体解剖与组织胚胎学。E-mail：18692990@qq.com基金项目：2010年成都医学院校基金资助项目（编号10Z10-029）。，石清明2，毕文杰1，（1 成都医学院人体解剖学教研室，四川省成都市，610083；2成都军区疾病预防控制中心,四川省成都市，610021）【摘要】目的：改进小鼠中脑神经干细胞分离培养方法。方法：分别采用机械法和酶消化法分离出生1-3天的小鼠中脑组织，在含体积分数为2%B27及20ng/mlbFGF的DMEM/F12培养基中

2、进行原代和传代培养。采用巢蛋白（Nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、及神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染色方法鉴定神经干细胞和分化细胞。结果：在含bFGF及B27的DMEM/F12培养基中，可形成悬浮生长Nestin呈阳性的神经球。诱导分化的细胞可见GFAP或NSE免疫反应阳性细胞。机械法较酶消化法可获得较多的神经干细胞。结论：在DMEM/F12培养基中添加2％B27及20ng/ml的bFGF可成功获得中脑神经干细胞，机械法为一种简便而有效的神经干细胞分离方法。【关键词】小鼠；中脑神经干细胞；分离；培养Researchof th

3、eMouse Mesencephalic Neural Stem CellsCulturedinVitroXIAOLi1，SHIQingming2，BIWenjie1，SU Bingyin1*（1．Department of Anatomy of Sichuan Province, Chengdu Medical College，Chengdu，Sichuan，610083，China；2．Center for Diseases control of Chengdu Military Area，Chengdu，Sichuan，610021，Chin

4、a）【Abstract】Objective：Theaimsofthisthesisistoimprovetheseparationandcultivationmethodsofthemousemesencephalicneuralstemcells．Methods：Usingmechanicalmethodandenzymedigestionmethods，themousemesencephalictissuesareseparatedafterbirthfrom1to3days．AfterbeingculturedorsubculturedinD

5、MEM/F12culturemediumwhichhaveavolumefractionof2%B27and20ng/mlbFGF，immunocytochemicalstainingmethodsuchasNestin，glialfibrillaryacidicprotein（GFAP），andneuronspecificenolase（NSE）areusedtoidentifyneuralstemcellsanddifferentiatedcells．Results：IntheDMEM/F12culturemediumwhichcontainb

6、FGFandB27，Nestinpositiveneurosphereissuspensiongrowing．TheGFAPorNSEimmunoreactivitypositivecellscanbefoundinthecellsafterinductionofdifferentiation．Comparedwithenzymedigestionmethod，themechanicalmethodcanobtainmoreneuralstemcells.Conclusion：Adding2%B27and20ng/mlbFGFintoDMEM/F1

7、2culturemediumcanobtainmesencephalicneuralstemcellssuccessfully．Themechanicalmethodisamoresimpleandmoreeffectivemethodinneuralstemcellsseparation。【Keywords】mouse；mesencephalicneuralstemcells；separate；culture神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）是具有自我更新能力和多向分化潜能的一类细胞。随着神经干细胞鉴定、诱导、迁移、整合等技术

8、的成熟，使得神经干细胞移植治疗帕金森病等神经变性疾病成为可能，且具有巨大的发展和应用前景[1]。中脑源性神经干细胞因具有向