构建sirna慢病毒载体调控人牙髓干细胞delta1表达的实验研究

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1、构建siRNA慢病毒载体调控人牙髓干细胞Delta-1表达的实验研究王雪飞，张纲，裘松波，何飞，谭颖徽，吴小波，汪蕾（第三军医大学新桥医院口腔科，重庆400037）摘要:目的构建Notch配体Delta-1基因慢病毒干扰载体及建立Delta-1基因稳定干扰的人牙髓干细胞系。方法将Delta-1基因特异性siRNA靶序列与双酶切慢病毒载体pGCSIL-GFP连接，转化，挑取阳性克隆进行PCR鉴定；利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人牙髓干细胞，分作DPSCs/Delta1-RNAi组、DPSCs/vector组和DPSCs/wt组；RT-PCR和We

2、sternblot分别检测Delta-1mRNA及蛋白的表达。结果经PCR和DNA测序鉴定，成功构建Delta-1特异性siRNA的慢病毒载体，并感染牙髓干细胞；经检测DPSCs/Delta1-RNAi组Delta-1mRNA及蛋白表达较DPSCs/vector组和DPSCs/wt组明显降低，DPSCs/vector组和DPSCs/wt组之间无明显差异。结论通过成功构建的Delta-1特异性siRNA慢病毒载体对人牙髓干细胞的转染实现了对其Delta-1mRNA和蛋白的调控。关键词：Delta-1；Notch信号通路；RNA干扰;慢病毒;人牙髓干细胞中图法

3、分类号：R780.2文献标识码：ARegulationofExpressiononDelta-1GeneinDPSCsbyspecificsiRNALentivirusVectorWANGXue-fei,ZHANGGang,QIUSong-bo,HEFei,TANYing-hui(DepartmentofStomatology,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037)Abstruct:Objective:ToconstructalentivirusvectorforRNA

4、interference(RNAi)ofDelta-1geneandestablishhumandentalpulpstemcellswithDelta-1genewereinhibited.Method:Delta-1specificsiRNAwasligatedwithdoubledigestedLentivirusvectorpGCSIL-GFPandobtainedthepositivecoloniesthatwerePCRscreened,DPSCswereinterferedanddividedintoDPSCs/Delta1-RNAigrou

5、p,DPSCs/vectorgroupandDPSCs/wtgroup,andverifiedbyRT-PCRandwesternblot.Result:TheligationofDelta-1specificsiRNAtothedoubledigestedlentivirusvectorpGCSIL-GFPwassuccessful.Delta-1andDelta-1mRNAexpressionofDPSCs/Delta1-RNAigroupwassignificantlyhigherthantheDPSCs/vectorgroupandDPSCs/wt

6、group,buttherewasnodifferentbetweentheDPSCs/vectorgroupandDPSCs/wtgroup.Conclusion:ThesuccessfulconstructionofDelta-1specificsiRNAlentivirusvectorsandtheregulationofexpressiononDelta-1GeneinDPSCsenrichedbasictheoryonfurtherstudyinproliferationordifferentiationofDPSCsandrepairfunct

7、ionofdamageddentalpulp.KeyWords:Delta-1;notchsignal;siRNA;lentivirus;humandentalpulpstemcellsNotch信号通路是一条进化上十分保守的信号转导系统，广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物的多个物种之中。其在胚胎、心血管、血细胞发育以及肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用，通过细胞间相互作用的方式精确地调节着细胞的分化、增殖和凋亡,在生物体发育过程中决定着细胞的不同命运[1-3]。本实基金项目：重庆市自然科学基金(CQCTSC,2007BB5016)；第三军医大学科研基金(

8、2006D136)作者简介：王雪飞，女，内蒙古呼和浩特市人，硕士研