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时间:2019-01-06
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1、姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用毛蜀,何密斯,刘桂元,张雄,李昱,唐俐(400016重庆,重庆医科大学病理生理学教研室,重庆医科大学病理学教研室,重庆医科大学神经科学研究中心)[摘要]目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用。方法细胞培养至对数生长期后用20~100μmol/L姜黄素处理24、48、72h,设对照组(Ct组)、姜黄素处理组(Cur组)。采用MTT法检测姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长抑制作用。流式细胞术分析Daoy细胞凋亡率;免疫细胞化学染色检测PI3K、p-Akt和Akt在细胞中表达情
2、况;Westernblot和RT-PCR分别检测PI3K、p-Akt和Akt蛋白及mRNA的表达水平。结果不同浓度姜黄素作用不同时间后,细胞受到不同程度的抑制,呈时间-剂量依赖关系(P<0.05)。48h时抑制作用显著,差异有统计学意义(F=131.829,P<0.05),且IC50为35μmol/L,细胞凋亡也最明显(29.7%)。PI3K、Akt和p-Akt蛋白在Ct组中的阳性表达率分别为80.7%、84.8%和87.5%;Cur组阳性表达率明显下降,分别为25.3%、58.8%和26.7%。两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)
3、。Westernblot显示Ct组PI3K、Akt和p-Akt蛋白灰度比值分别为1.1413±0.032,1.047±0.174,1.173±0.0130;Cur组PI3K和p-Akt蛋白灰度值降低,分别为0.8751±0.029,0.958±0.150。两组比较,差异有统计学意义(t=15.530,33.482,P<0.05)。RT-PCR显示发现Ct组PI3K、AktmRNA灰度比值分别1.166±0.031,1.072±0.007;Cur组PI3KmRNA灰度值为0.833±0.033。两组比较,差异有统计学意义(t=12.468,
4、P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制PI3k/Akt信号通路,阻碍髓母细胞瘤Daoy细胞的增殖、诱导凋亡。[关键词]髓母细胞瘤;姜黄素;PI3K/Akt信号通路[中图法分类号] R739.41 [文献标志码] ATheroleofCurcumintoPI3k/AktsignalingpathwayinhumanmedulloblastomaMaoShu,HeMisi,LiuGuiyuan,ZhangXiong,LiYu,TangLi(DepartmentofPathophysiology,DepartmentofPathology,I
5、nstituteofNeuroscience,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheroleofCurcumintoPI3k/Aktsignalingpathwayinhumanmedulloblastoma.MethodsDaoycellsweretreatedwithcurcuminatdifferentconcentrations(20~100μmol/L)andtimeintervals(24,48,
6、72hours)whentheywereinthelogarithmicgrowthphase,andthentheDaoycellsweredividedintothecontrolgroupandthecurcumingroup.TheproliferationandapoptosisofDaoycellswasanalyzedbyMTTassayandflowcytometry,respectively,andtheexpressionofPI3K,Aktandp-AktatmRNAandproteinlevelswasdetect
7、edbyimmunocytochemistry,RT-PCRandwesternblotting,respectively.ResultsExposureofcellstocurcuminresultedindecreaseofcellproliferationratindose-andtime-dependentmanners(P<0.05).Theinhibitionratesreachedpeakandasignificantincreaseofcellapoptosiswasobservedwhentheconcentration
8、ofcurcuminwas35μmol/Landat48hoursaftertreatment.ThepositiveexpressionratesofPI3K,Aktandp-Aktinth
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