载脂蛋白e亚型通过细胞外信号调节激酶途径影响轴突生长锥的生长

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1、载脂蛋白E亚型通过细胞外信号调节激酶途径影响轴突生长锥的生长殷成，蒋理，周帅，孙晓川（400016重庆，重庆医科大学附属第一医院神经外科）[摘要]目的观察载脂蛋白E（apolipoproteinE，apoE）各个亚型对神经元轴突生长锥的影响并探索其机制。方法体外培养小鼠皮质神经块，加入重组人类apoE到神经块培养基中，免疫荧光和Westernblot检测重组人类apoE能否进入轴突及其生长锥；鬼丙环肽染色生长锥观察重组人类apoE2、3、4对生长锥的影响；加入细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-re

2、gulatedkinase,ERK)信号通路抑制剂，观察ERK信号通路是否参与apoE亚型对生长锥的影响。结果免疫荧光和Westernblot显示加入重组人类apoE后的神经块轴突及其生长锥中apoE为阳性；加入重组人类apoE2、3、4组的荧光强度分别为50.7±19.4、58.5±15.4、23.4±13.5，其中加入重组人类apoE4的轴突生长锥荧光强度低于加入重组人类apoE2、3的生长锥荧光强度（P<0.05）；同时加入重组人类apoE4和ERK信号通路抑制剂的实验组生长锥荧光强度为32.8±13.2，而仅加入重

3、组人类apoE4的实验组生长锥荧光强度为21.9±6.9，实验组生长锥荧光强度高于对照组（P<0.05）。结论重组人类apoE能进入轴突及其生长锥；apoE4能负性影响生长锥生长；阻断ERK信号途径能抑制apoE4对生长锥的负面影响。[关键词]神经块；轴突；生长锥；载脂蛋白E；细胞外信号调节激酶ApoE4influencesthegrowthconeofneuronalaxonthroughERKsignalpathway.YinCheng,JiangLi,ZhouShuai,SunXiaochuan*（Departmen

4、tofNeurosurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China）[Abstract]ObjectiveToobservetheeffectofapoEsubtypesonthegrowthconesofneuronalaxonsandexplorethepossiblemechanism.MethodsCulturingthecorticalexplantsofmiceinvitro,addingthe

5、recombinanthumanapoEintoculturemedium,theimmunofluorescenceandwesternblotwereusedtodetectrecombinanthumanapoEwhetherenteringaxonsandgrowthcones;PhalloidinwasusedtodyethegrowthconeswhichwereculturedwithrecombinanthumanapoE2,3,4;ERKinhibitorwasaddedintoculturemedium

6、todiscoverERKpathwaywhetherparticipatingintheprocessofapoEsubtypesinfluencingthegrowthcones.ResultsThedataofimmunofluorescenceandwesternblotshowedtherecombinanthumanapoEwaspositiveinaxonsandgrowthcones;thefluorescenceintensityofaxonalgrowthconeswhichculturedbyapoE

7、2、3、4was50.7±19.4，58.5±15.4，23.4±13.5,thefluorescenceintensityofaxonalgrowthconeswhichculturedbyapoE4wasweakerthanthatofgrowthconeswhichculturedbyapoE2orapoE3（P<0.05）;thefluorescenceintensityofgrowthconeswhichculturedbyapoE4andERKinhibitorwas32.8±13.2,butthetheflu

8、orescenceintensityofgrowthconeswhichculturedonlywithapoE4was21.9±6.9,thefluorescenceintensityinexperimentalgroupwasstrongerthanthatincontrolgroupwithout