血浆mir-20a和let-7a在卵巢癌中的表达及其临床意义

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1、血浆miR-20a和let-7a在卵巢癌中的表达及其临床意义孟伟伟，贺付成，吕品，曲蕴慧(450052郑州，郑州大学第一附属医院检验科)[摘要]目的检测miR-20a和let-7a在卵巢癌患者血浆中的表达，探讨其临床意义。方法选取卵巢癌患者50例为实验组，另选择同期与其年龄性别相匹配的健康体检者20例为健康对照组，采用实时定量荧光定量酶链反应（qRT-PCR）检测血浆miR-20a和let-7a表达水平，同时采用电化学发光法测定其血浆中糖类抗原125（CA125）的含量并进行统计分析。结果卵巢癌患者血

2、浆中miR-20a和let-7a的相对表达量分别为（4.02±3.77）、（0.42±0.34），卵巢癌患者血浆中miR-20a和CA125的表达均高于对照组（P＜0.01），let-7a表达低于对照组（P＜0.01）。临床病理分期I~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者血浆let-7a相对表达量的中位数分别为0.39、0.21，差异有统计学意义（P＜0.01），而血浆miR-20a的表达与临床病理分期无关（P＞0.05），miR-20a和let-7a的相对表达量与年龄、淋巴结转移和组织学分类均无关（P＞0.05

3、）。miR-20a、let-7a和CA125的ROC曲线下面积为0.898（95%CI：0.802～0.957）、0.876（95%CI：0.775～0.942）、0.819（95%CI：0.708～0.900）。结论卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a均表达异常，提示能够成为辅助诊断卵巢癌的标志物。[关键词]卵巢癌；miR-20a；let-7a；CA125；血浆[中图法分类号]R737.3[文献标志码]A卵巢癌占女性肿瘤死亡率的第4位，全世界每年发病的大约200000例卵巢癌中有125000

4、例死于此病，由于70%的患者就诊时已属晚期,常形成难治的复发及转移,而缺少早期的诊断方法是其主要原因[1]。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类在生物体内源长度为20~23nt的非编码型小RNA，通过对mRNA的降解和抑制其翻译来影响目的基因的表达，其在肿瘤的发展过程中也发挥了重要的作用[2-3]。在人类基因组中，miR-17-92簇编码6个miRNAs，包括miR-17-5p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1，其作为原癌基因能够促进细胞

5、增殖，抑制肿瘤细胞的凋亡，并诱导肿瘤的血管生成[4]。miR-20a的过度表达与癌细胞凋亡和恶性转化有一定的相关性，在肝癌、胰腺癌及前列腺癌等肿瘤中均有报道[5-7]。let-7最早是在秀丽隐杆线虫中被发现的miRNA，是线虫从幼虫到成虫形态转变的关键性调控因子，而let-7a是let-7家族中的一员[8]。在人体中let-7a以肺组织的表达量最高，与肺癌的关系最为密切，同时与其他肿瘤的发生和发展也密切相关[9]。本研究通过对血浆中miRNA-20a和let-7a的表达进行检测，旨在探讨其在卵巢癌诊断

6、中的作用。1材料与方法1.1研究对象经本院伦理委员会批准,选取2013年8月到2014年4月在郑州大学第一附属医院妇产科确诊为卵巢癌患者50例为实验组，年龄（44.90±12.44）岁,另外选择20例与其年龄、性别相匹配的健康体检者作为对照组，年龄（44.35±13.61）岁。按FIGO分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期19例，Ⅲ期13例，Ⅳ期6例，其中淋巴结转移16例。按WHO组织学分类标准：浆液性癌22例,子宫内膜样癌12例,粘液性癌11例，透明细胞癌3例,其他2例。两组受检者均为自愿参加并签署知情同意书。[

7、通信作者]贺付成，E-mail:hefucheng@126.com1.2试剂及仪器TRIzol和RT反转录试剂盒购自日本TaKaRa公司；荧光定量反转录试剂盒购自上海生物工程有限公司；引物由广州瑞博生物有限公司合成；CA125电化学发光试剂盒(Roche公司)；其他试剂均为国产分析纯试剂。Nano-Drop2000C紫外分光光度计(美国赛默飞世尔公司)；7500FastReal-TimePCR仪(美国ABI公司)；罗氏全自动生化分析仪。1.3CA125的测定实验组与对照组均于上午9点前空腹采集静脉血2

8、mL，置于肝素抗凝管中，将标本以3500×g离心5min，上层血浆移至EP管内。采用化学发光免疫法使用罗氏全自动生化分析仪上机测定。1.4miR-20a和let-7a的测定实验组与对照组均于上午9点前空腹采集静脉血2mL，置于EDTA-K2抗凝管中。将标本以2000×g离心10min，上层血浆移至EP管内，然后以12000×g离心15min，取上层血浆200μL。TRIzol法提取血浆的总RNA，特异的茎环引物反转录按照反转录试剂盒说明书配置20μL体系