靶向egfr基因rna干扰对人卵巢癌skov_3细胞增殖的抑制作用

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1、靶向EGFR基因RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用郭启帅基金项目：重庆市科委自然科学基金，(项目编号：2005-BB-5314)；SupportedbyNaturalScienceFundofChongqing.(2005-BB-5314)1第一作者：郭启帅（1979－），男，在读博士研究生．Tel：（023）66758086；E-mail:guoqis@sohu.com．2通讯作者：李少林（1946－），男，博士生导师，教授．Tel：（023）68485060；Email：shaolinli202@sina.com．，黄曦2，吴永忠3，李少林1(1.重庆医科大学放射医

2、学教研室400016；2.重庆医科大学附属第一医院血液科400016；3.重庆市肿瘤研究所400030)[摘要]目的：利用RNA干扰技术下调EGFR基因的表达，观察其对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法：构建针对EGFR基因的siRNA真核表达载体，转染入卵巢癌SKOV3细胞中，并筛选稳定表达siRNA的转化克隆，RT-PCR及Western-Blot分别检测EGFRmRNA和蛋白表达情况，克隆形成实验及MTT法检测细胞克隆形成率及细胞体外的增殖情况。结果：成功构建表达质粒pGenesil-HK、pGenesil-EGFR1和pGenesil-EGFR2，并转染SKOV3细胞，通过

3、G418筛选后获得稳定转染克隆，RT-PCR及Western-Blot分析表明转染pGenesil-EGFR1、pGenesil-EGFR2后的细胞EGFR的mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制，抑制率分别为41.87％、68.07％和45.21％和70.25％。转染pGenesil-HK组克隆形成率为0.82±0.03；转染pGenesil-EGFR2组克隆形成率为0.61±0.04，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05），MTT显示细胞培养36h后，pGenesil-EGFR2组的细胞生长均显著低于未转染组和转染pGenesil-HK组（P＜0.05）。结论：靶向EGFR基因RN

4、A干扰能够阻抑卵巢癌SKOV3细胞中的EGFR表达，对其增殖有明显抑制作用。[关键词]RNA干扰；表皮生长因子受体；卵巢癌；SKOV3细胞[中图分类号]R737.31【文献标识码】AEffectofRNAinterferencetargetingEGFRgeneonproliferationofhumanovariancarcinomacelllineSKOV3GUOQi-Shuai1，HUANGXi2，WUYong-Zhong3，LIShao-Lin1(1.DepartmentofRadiationMedicine，ChongqingMedicalUniversity，Chongq

5、ing400016，China；2.DepartmentofHematology，TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China；3.CancerinstituteofChongqing，Chongqing400030，China)[ABSTRACT]0bjective：Toexploretheinfluenceofdown-regulatingEGFRexpressionbyRNAinterferenceontheproliferationofovariancarcinomaS

6、KOV3cells.Methods：TherecombinanteukaryoticexpressionplasmidspGenesil-HK、pGenesil-EGFR1andpGenesil-EGFR2wereconstructedandtransfectedintoSKOV3cells.ThemRNAandproteinexpressionsofEGFRinSKOV3cellsweredetectedbyRT-PCRandWestern-Blotting,respectively.TheproliferationofSKOV3cellsinvitrowasdeterminedb

7、ycloneformationassayandMTTassay.Results：wesuccessfullyconstructedtherecombinanteukaryoticexpressionplasmidspGenesil-HK、pGenesil-EGFR1andpGenesil-EGFR2andtransfectedintoSKOV3cells.ThreecellcloneswerescreenedbyG418.Comparedwithuntra