医学毕业论文cmv抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用

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1、XX大学毕业论文CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用2014年6月25日作者：宋鹏，刘陶，杨浩，韩锋产，陈五岭【关键词】人巨细胞病毒Developmentandprimaryapplicationofimmunogoldfastdctcctionkitforhumancytomegalovirus[Abstract]AIM:Todevelopacheapandeasytousekitbasedondotimmunogoldfiltrationassayforanalysisofantibodyofthehumancytomlegalovi

2、rusinscrum.METHODS:WithpreparedGICAapparatusandcolloidalgoldwhichwerecoupledwithSPA,thegoldSPAconjugatereactedwithhumanIgGinserumandmigratedalongthenitrocellosestriponwhichthebranchedmultipleantigenicpeptideofhumancytomlegaloviruswasimmobilized.IftheserumcontainedantiHCMVIgG,t

3、herewouldbearedlineonthestripwherethebranchedmultipleantigenicpeptideofhumancytomlegaloviruswereimmobilized・RESULTS:Atotalof120seraweredetectedforantiHCMVIgGbyGICAandELISA.ThesensitivityandspecificityofGICAwere97.9%and87.5%.Thecorrespondingrateofbothtestswas95.8%.CONCLUSION:GI

4、CAisasensitive,specific,simpleandrapidassayfordetectingantiHCMVIgGinsera.【Keywords]Humancytomegalovirus;Branchedmultipleantigenicpeptide;gololcolloid;enzymelinkedimmunosorbentassay【摘要】口的：开发一种低成本、简单易用的基于免疫金渗滤法的试剂盒，以用于检测分析血清中的巨细胞病毒抗体.方法：将用人工合成的人巨细胞病毒(HCMV)抗原表位的线性肽和分支多抗原肽分别划线同定于硝

5、酸素纤维膜上，制成免疫层析检测试纸条，血清中IgG与测试条上金标记物结合后沿硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色带条并用GICA和ELISA试剂盒对比检测120份血清标本中抗HCMV抗体结果：分支多抗原肽制成的免疫层析检测试纸条的灵敏度为97.9%,特异度为87.5%,两法符合率为95.8%.结论：GICA检测血清中的抗HCMV抗体特异性强，灵敏度高，简便快速，冇广泛应用价值.【关键词】人巨细胞病毒；分支多抗原肽；胶体金；酶联免疫吸附测定0引言人巨细胞病毒（HCMV）感染的普遍性和严重性已引起医学界的高度重视[1].但HCMV感

6、染吋，临床症状变化很大，可随患者年龄、机体状况、感染途径不同而异.现今实验室检测手段包括ELISA检测患者血清屮IgG和IgM,套式PCR技术检测血清HCMV的DNA,RTPCR检测HCMV的mRNA以及病毒培养等，但由于以上方法耗时耗力[2],R检测费用较高，不适合在基层临床医疗机构的普及性筛查.为此，我们采用人工合成的包含HCMV抗原表位的线形多肽以及多抗原肽，采取胶体金免疫层析法[3],对HCMV进行快速检测.1材料和方法1.1材料制备型HPLC（Beckman公司）；核酸蛋白检测仪（上海嘉鹏科技有限公司）；激光解析质谱（Hewlettpac

7、kard公司）；台式冻干机（军事医学科学院四环仪器厂人同相萃取小柱（Waters公司）；茹卬氧拨基（Fmoc）保护的氨基酸（Merck公司）；1氧3双二甲胺琰基苯骈三氮哩四氟化硼（TBTU）、1轻基苯并三氮呼（HOBT）（ABI公司）；线性多聚赖氨酸、DIEA、三氟乙酸（TFA）（Sigma公司）；GIO,G25凝胶（Pharmacia公司）；乙月青（Fisher公司）；HCMVELISA对照试剂盒（德国VIRION公司）；氯金酸（成都化学试剂厂）；葡萄球菌A蛋白（SPA）（卫生部上海生物制品所）；点膜器（美国BioDot公司）.HCMV质控血清为

8、第四军医人学全军基因诊断技术研究所提供，血清标本从第四军医人学西京医院收集.1.2方法121HCMV抗原表位设计参照文献[