血吸虫抗体快速检测试剂盒综述资料

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1、血吸虫抗体快速检测试剂盒的综述资料1、产品预期用途1.1产品预期用途：血吸虫抗体快速检测试剂盒（斑点免疫金渗滤法）简称试剂盒，是用于体外定性人血清中是否有血吸虫抗体，是用于诊断血吸虫病的依据，也是血吸虫病预防控制的基础、流行病学调查的工具、疫情监测的手段。1.2与预期用途有关的临床适应症背景情况：血吸虫病免疫学诊断方法是十分可靠的辅助诊断依据，也是流行病学调查最常用的工具。1.3相关的临床或实验室诊断方法及产品现状等：血吸虫病是一种严重威胁人类健康的流行性传染病，发展有效的诊断筛查方法能促进血吸虫病流行的预防控制工作。国内外已建立用于血吸虫病诊断的病原学、免疫学及分子生物学

2、等多种方法，病原学诊断方法（粪便查虫卵）由于敏感性较低，分子生物学方法（如PCR）需要特殊的仪器设备，均难以在流行区现场推广。目前，常用的血吸虫病现场筛查方法仍以免疫学方法为主，如酶联免疫吸附法（ELISA）、环卵沉淀（COPT）、间接血凝（IHA）。随着现代免疫理论和技术的进步，免疫学检测技术得到了不断发展和更新，快速简便，易于操作的免疫学诊断方法更易于被医技人员，尤其是现场防治人及患者所接受。上海疾控生物科技有限公司生产的“血吸虫抗体快速检测试剂盒”操作简便，不需要使用仪器设备，结果易于判读，适合于各级医疗卫生机构及现场血吸虫病防治人员使用。此方法纳入了中华人民共和国卫

3、生行业标准—血吸虫病诊断标准（WS261-2006）目前国内外尚无类似产品。2、产品描述2.1产品所采用的技术原理：氯金酸(HauCI)在还原剂的作用下可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液称胶体金。胶体金颗粒表面带有负电荷与蛋白质等生物大分子的正电荷基团因静电作用形成牢固结合，而蛋白质的生物活性无明显的改变。当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点。2.1.1血吸虫抗体试剂盒测定原理：斑点免疫金渗滤法（Developmentofdotimmunogoldfiltrationassay，DIGFA)是以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜的可滤过性

4、和毛细管作用，使抗原抗体反应在一个特殊的渗滤装置上，以液体渗滤过膜的方式迅速完成。渗滤装置为一充满吸水垫料的塑料小盒，在盒盖中央的小孔下面放置了一片硝酸纤维素膜，膜上预包被血吸虫抗原斑点，试验时将血清滴加在膜上，通过渗滤使抗原抗体在膜上发生免疫结合反应，然后滴加金标结合物，使其与对应的抗体结合并显色，阳性结果在膜上出现红色斑点，反之，则为阴性结果。斑点颜色的深浅相应地提示阳性强度。2.1.2试剂盒产品的组成：试剂盒是由检测盒、洗涤液、显色液组成。检测盒为ABS材料制成的一个白色带孔塑料盒，塑料盒孔内的滤膜上包被有点状可溶性血吸虫抗原的检测点及人IgG的质控点。洗涤液由TBS

5、、吐温20组成。SJK-DIGFA-007第6页共6页血吸虫抗体快速检测试剂盒的综述资料显色液由氯金酸、鞣酸-柠檬酸钠、羊抗人IgG组成。2.1.3测定主要参数试验方法：将试剂盒取出，置于室温下回暖，编号；在检测盒中央小孔内滴加2滴洗涤液，渗入后于反应板中央加25µl受检血清，待液体充分吸入，加2滴洗涤液，渗入后加4滴显色液，最后加2滴洗涤液，渗入后即可判断结果。出现两个红色斑点为阳性，出现一个红色斑点为阴性，无斑点表示结果无效。（洗涤液与显色液每滴约为40ul）2.2主要原材料来源及制备方法2.2.1产品的组成洗涤液TBS、吐温20显色液氯金酸、鞣酸-柠檬酸钠、羊抗人Ig

6、G检测点试液0.2mg/ml质控点试液0.01mol2.2.2主要原料的规格来源洗涤液外购显色液外购【由上海市疾病预防控制中心提供】检测点原料外购【由上海市疾病预防控制中心提供】检测点试液自制质控点试液自制塑料盒定制吸水纸符合GB/T20808-2006外购【国产】硝酸纤维素膜外购【进口】2.2.3主要原料的制备方法2.2.3.1血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）（试剂盒检测点原料）（1）制备方法：取人工感染1500条日本血吸虫尾蚴45d的家兔肝脏，用生理盐水洗净后经高速捣碎机捣碎，分样筛分离除去肝脏组织，沉淀离心，收集分离虫卵，依次经200目和300目尼龙绢过滤，收集滤渣，即

7、为较纯净的血吸虫虫卵。然后加入10倍量的生理盐水，置玻璃匀浆器内制成匀浆，用超声粉碎机超声处理（1min×10次），液氮冻融3次，最后以10000r/min离心30min，上清液即为血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA），经0.22um超滤膜过滤除菌后分装，―20℃冻存备用。（2）工作浓度：SEA的作用是作为检测点，包被于硝酸纤维素膜上，用于检测人血清中特异性抗血吸虫抗体。因此，其工作浓度的选择对于检测效果的评价是试剂盒研制的关键技术。如果浓度过高，阳性反应色度过强，易产生假阳性结果；反之，浓度过低，则不易辨别，影响检测的