组织培养实验二

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1、实验二MS培养基母液配制与保存一、目的要求学习培养基母液的配制，为培养基的配制做准备。二、基本原理培养基是石物离体培养赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主耍包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节物质。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度按比例稀释。木实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。三、试剂与主要用具1、仪器、用具分析天平(感量O.Olg和O.OOOlg)、药匙、玻棒、称量纸、吸水纸、滴

2、管、洗瓶、标签纸、烧杯(50ml、100ml>200ml)、容量瓶(100ml、200ml、500ml>1000ml)、试剂瓶(100mL、200mL>500ml、1000ml)、量杯、量筒、移液管、洗耳球、电炉等。2、试剂(1)95%乙醇、lmol/LNaOH、lmol/LHC1O(2)MS培养基各成分试剂。(3)植物生长调节剂:2,4-D、6-BA、IAA、NAA等。(4)洗涤剂。四、方法步骤1、大量元素母液的配制按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，按照表屮的次序分别准确称量后，分别用50ml烧杯，加入蒸馆水30ml溶解(可以加热至60

3、°C〜70°C,促其溶解)。溶解后，按顺序倒入-大烧杯屮(烧杯屮事先加入约50ml的蒸憎水,廿的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉淀)，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用250mL容量瓶定容。将配制好的母液倒入试剂瓶屮，贴好标签，保存于4°C冰箱屮待用。MS培养基大量元素母液(10倍)的配制剂量母液化合物名称培养基用量(mg/L)扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培詐基吸取母液量(mL)大量11*kno319004750NHAOs16504125MgSO4•7H20370109252501007L素kh2po41

4、70425CaCl2•2H,044011002、微量元素母液的配制按照培养基配方的用量，将微量元素各种化合物扩大100倍，用万分Z—天平分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，于4°C保存。MS培养基微量元素母液(100倍)的配制剂量母液化合物名称培养基用量(mg/L)s称取量(mg)母液体积(mL)IL培养基吸取母液量(mL)MnSOi•4H2022.3223微量元素ZnSO4•7H.08.686h3bo36.262KI0.831008.310010Na.MoO,•21L00.252.5CuSOr5II200.0

5、2510ml*CoCl2•6H200.02510ml***、因天平存在误差，为减少误差带来的影响，建议称取2.5g,溶解并定容至100ml容量瓶中，然后移取10ml,加入混合液中。3、铁盐母液的配制常用的铁盐是FeS04•7H20和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配成母液。配制时，按照扩大后的用量,分别称取FeSO4-7H20和脳-EDTA,分别溶解后,将FcS0“溶液缓缓倒入Na2-EDTA溶液(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分螯合，定容后贮放于棕色玻璃瓶中，并保存于冰箱中。MS培养基铁盐母液(100倍)的配制剂量母液化合物名称培养基用量(mg/L

6、)扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培养基吸取母液量(mL)铁盐Na2-EDTA37.310037310010FeSO,-7H2027.82784、有机物母液的配制按照表中各成分浓度扩大后的用量，用感量O.OOOlg天平分别称量各有机物。混合溶解定容，製入试剂瓶小，写好标签，放入冰箱小保存。MS培养基有机物母液(100倍)的配制剂量母液有机物名称培养基用量(mg/L)扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培养基吸取母液量(mb)有机物甘氨酸盐酸硫鞍素Vbi盐酸毗哆醇％烟酸肌醇1OO02o•••0554010020455100010010一

7、般有机物都溶于水,但叶酸(VBc)先用lmol/LNaOII溶液溶解;VH(生物素)先用1mol/LNaOH溶液溶解；*VI)3＞比亡应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸纟留水定容。5、激素母液的配制激索母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是0.1〜2mg/nil,根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分Z—大平。配制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见下表。植物组织培养中常用植物激素、牛氏调节物质的溶剂中文名缩写溶剂2,4-二氯苯氧乙酸2,4-DNaOH/乙醇卩引味乙酸IAANaOII/乙醇卩引味丁酸1BANaOH/乙醇

8、a-蔡乙酸NAANaOH/乙醇6-节基氨基腺喋吟6-BANaOH/HCl激动索KTNaOH/HCl脱落酸AB