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1、生物工程大实验30L发酵罐上黄原胶发酵实验L卩■名：学号：学院：生命学院专业：生物工程年级：同组成员:1.材料和方法121斜面培养基（100ml）葡萄糖3.0；蛋白陈0.5；酵母粉0.3；氯化钠0.5；琼脂2.0；pH7.0-7.3灭菌条件:115°C,20min；培养温度:30°C；培养时间:24-48h1.2.2种子培养基（100ml）葡萄糖2.0；蛋白腺0.5；酵母粉0.1；牛肉膏0.3g；pH7.0-7.3灭菌条件：115°C,20min；培养温度：30°C；培养时间：10-15h123发酵培养基（100ml）葡萄糖3.0；蛋白月东0.2；酵母粉
2、0.1；Na2HPO4•12H2O0.252；KH2PO40.3；K2SO40.1；MgSO4-7H2O0.1；pH7.0-7.3灭菌条件:115°C,20min；培养温度：30°C；培养U寸间：48-62h1.3.培养条件1.3.1斜面培养1）配置400ml的斜面培养基，分装试管，于115°C下灭菌20min,之后摆斜面,冷却至室温后，将凝固后的斜而放于30°C培养箱过夜。2）转接斜面菌种，将转接好的斜面菌放于30°C培养箱培养24-48ho1.3.2一级种子培养1）配置种子培养基：按照种子培养基配方配制3000ml,分别分装到5000ml和500ml
3、的三角瓶中，装液量分别为100ml/500ml三角瓶（用于一级种子培养）;1000ml/5000ml三角瓶（用于二级种子培养），于115°C下灭菌20min。2）接种：将培养好的斜面菌种接种到一级种子培养基中（100ml/500ml三角瓶）,接种量为每瓶2・3接种环，放在30°C摇床培养10-15h,转速为200rpm。1.3.3二级种子培养将培养好的一级种子接种到二级种子培养基中(1000ml/5000ml三角瓶)，接种量为10%(v/v),放在30°C摇床培养6-8h,转速为200rpmo1.3.4发酵罐培养1)配置发酵培养基20L,考虑到接入的种子
4、液的体积(10%,2000ml),所以培养基配置定容时为18Lo2)将培养好的二级种子接种到发酵罐中，接种量为10%(v/v),温度30°C,发酵罐初始搅拌转速约为100rpm,通风量1.5-2.0vvm,初始pH为7.0-7.3,屮间过程不控制pHo1.4检测方法1.4.1发酵液OD取一定体积的发酵液进行适当稀释，然后用分光光度计在620nm波长下测定吸光度。1.4.2葡萄糖含量取一定发酵液进行适当稀释，8000rpm/min离心15min,取上清，采用SBA检测。1.4.3发酵液粘度发酵过程中取大约100ml发酵液，用Blankspoon粘度计(DV
5、-E,VISCOMETER)测定其粘度。1.4.4黄原胶产量测定发酵结束后取10ml发酵液，用3倍体积无水乙醇沉淀黄原胶，8000rpm/min离心15min,去上清，沉淀的黄原胶50°C通风箱内干燥至恒重，用分析天平称重。1.4.5pH值测定用pH计测定发酵液的pH值。1.4.6菌体干重的测定取发酵液10ml加入20ml去离子水稀释，放置在80°C水浴锅中用1mol/1NaOH调节pH10后，水浴15min,然后再用1mol/1HC1调节pH7.0,迅速12000rpm离心20min,去上清，留沉淀，于50°C通风箱内干燥至恒重（8・10h）。1.4.
6、7计划取样时间及待测参数：前24h发酵过程中，每隔4h取一次样测定pH、发酵液OD、黄源胶产量、菌体干重，葡萄糖含量、发酵液粘度。1.结果与讨论2.1实验图片其中A为斜面上菌的镜检图B为二级种子镜检图C为28.5h镜检图D为70h镜检图2.230L发酵罐上的发酵曲线a）发酵曲线汇总70006000500040003000200010000—■—菌「重一▼—残糖量一。一浴羊〔应10胶干重粘度_e_pH70-b)干重40-■30-20-210-0-01I'I'I•I1I•I•I•F-10010203040506070时间/h(％)50403020100-10
7、-20----------------(W6)耳H-空-42011186420----------------8070」•菌干巫一拟合直线28262422(_&)Ms086420211111861-■•■J■■Jooooo65432(£6)10-■0-Ch^/DoF=11.19456RA2=098877A1455946+133188A264.07799±202577xO3526724±093147P928765+163791Data:DataljunModel:LogisticEquationy=A2♦(A1-A2)/(1丰(*7x0)8)Weighti
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