微生物工程实验报告

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1、中国海洋大学实验报实验培养基的配制和灭盲一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。4.每2人一组，每人一份实验报告。二、实验材料1、药品:酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KN03、MgS04.7H20、FeS04•7H20、INHC1、INNaOH。2、设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。3、材料：天平、药匙、电炉、pH试纸、烧杯、量简、5mL、lOrnL注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、

2、牛皮纸、线绳、标签等。移液器（ImL0.2mL）。三、实验内容（一）培养基的配制1、培养基的配制方法和步骤1）称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。2）溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。3）调Pn值：用inNaon或innci调Pn,用Pn试纸对照。4）加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。5）分装：注意不要污染试管塞或纱布。6）包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。7）灭菌：在高压锅中，115%高温灭菌30min。2、培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0,酵母粉1

3、.0,海水IL,pH8.0。取50mL分装250mL三角瓶后，8层纱布封口，外包1层牛皮纸，121%高温灭菌20minoA.2216E斜面（固体）：海水2216E液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内加入3mL,121%高温灭菌200^,灭菌后摆斜面。2支/小组，共65组，130支。（15X150规格，带试管帽）300mL。B.无菌生理盐水和保种液：生理盐水：NaCl0.85%蒸馏水配制。每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121%高温灭菌20min。保种液：生理盐水，加25%卄油。C.碳源优化培养基：以海水221

4、6E液体培养基（蛋白胨0.5%,酵母粉0.1%,磷酸铁0.01%,人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。优化实验中每小组做1种碳源，即5个小组完成一个碳源优化实验。每种碳源配12瓶（50mL/个三角瓶，共600mL。8层纱布封口，外包1层牛皮纸，灭菌。）（二）分离培养微生物常用器皿的准备1、清洗一些玻璃仪仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿等。2、制作8层纱布（108个），酒精棉（2瓶）。3、Tip头（0.2，1ml，分装枪头盒，牛皮纸包好，灭菌）；保种管（6支/包，共12包

5、）药勺（1把/包，共12包，包好，灭菌）长竹签（6支/钮，共12钮，懷，灭菌）4、卫生（308实验室超净台，实验台面）（三）培养基和玻璃器皿的灭菌方法1、加压蒸汽灭菌法。其步骤如h1）火菌锅内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。2）接通电源，进行加热。3）排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出冷空气后关闭排气阀：或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到将近零时，再关闭排气阀。4）当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌锅内的温度为121°C,维持30min。对热

6、不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5）灭菌时间一到，切断电源。待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌锅盖，取出物品。2、紫外线灭菌一般使用30W灯管，9m3空间，距地面2m,打开紫外灯照射0.5h，可使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此上适用于空气表面杀菌。3、化学药剂消毒灭菌微生物实验室中常用的化学杀菌剂有酒精、中醛、高锰酸钾、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、来苏尔、过氧乙酸等，

7、它们有的是杀菌剂，有的是抑制剂。UI思考题1、答1)2)3)固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？固体培养基加琼脂后加热溶化时应该注意一下问题：在加热融化时要注意温度。因为琼脂是由从石花菜屮提取的胶体多糖制成，它在98°C水中能溶解，温度降至45°C时就凝成固体。所以温度太低时会使琼脂凝成固体，太高乂会使其糊化；受热要均匀，可以垫上石棉网，在加热过程中，要用玻璃棒不停缓慢搅拌，防止糊底或者是溢出，加热溶化后要注意补充所失水分；加热完毕后，需在合适的温度（60dC左右）倒平板，防止凝固。2、培养基中加琼脂的作用是什么？答：琼脂性

8、质稳定，不能被大部分微生物水解利用。它是一种高分子的碳水化合物，从红藻等海藻中提取，仅溶解于热水，成为溶胶，冷后（4（rc以下）即凝固为固体状成凝胶。培养基屮加琼脂的作用是：1）用作凝固剂。琼脂是多糖类物质，性质较稳定，一般稳定后不易