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1、生物工程大实验第一部分前言-、相关概念1、生物工程(bioengineering)：运用生物学、化学和工程学等学科相结合的方法，利用生物体制造人类所需产品、改造环境的一门多学科交叉的应用技术。2、研究对彖：从微生物扩展到动植物细胞、微藻，研究领域从陆地扩展到海洋、太空。在微生物工程(发酵工程)、酶工程、基因工程、细胞工程、生物反应工程、生物分离工程等经典生物工程技术基础上，诞生了代谢工程、蛋白质工程、组织工程等新型生物工程技术。3、应用：生物工程已经在食品、医药、轻工、农业、环境保护、能源等领域
2、发挥了重要作用，己经产生了巨大的经济效益与社会效益。20世纪70年代开始，转基因技术、系统生物学、生物信息学、化学生物学、基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学等学科或技术的建立与发展极人地推动了生物工程的快速发展。目前，牛物工程已经成为与微电子技术、新材料技术和新能源技术并列的重要科学技术，対于解决人类面临的粮食、健康、环境、能源等重大问题将发挥越来越重要的作用。二、实验目的通过本课程的教学使学生了解和掌握生物工程的基本原理、方法、技术和技能，通过学生的独立实验设计和实践，训练学生分析问题和
3、解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生的创新思维以及对生物工程探索的兴趣和爱好。三、实验目标通过本课程的教学使学生了解和掌握生物工程的基本原理、方法、技术和技能，通过学生的独立实验设计和实践，训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生的创新思维以及对生物工程探索的兴趣和爱好。四、实验要求：1、每组3人自由组合，每个人独立完成实验；2、按组签到，不签到按旷课处理；3、实验过程中要认真按要求做，出现失误可找时间或跟其他班（组）补；4、实验结杲独立，不能与其他人雷同；我们是一个大
4、实验，分成若干小实验，小实验间相互结合，每一步是下一步的材料，要保证连续性；5、实验报告，以一个大实验形式、分成若干小实验來写；要求打印，格式一定要按下列标准来做：B5纸、页边距左2.5,上、下、右均为1.5,双面打印（注意奇数页和偶数页页边距）；小四字号、宋体，1.5倍行距。五、实验准备1、蓝、黄、白枪头，每组各一盒；Ep管装满50mL烧杯；包好灭菌.2、LB培养基配制（1）每人需要材料：1个三角瓶（50ML）,试管4个（5mL）,{250-300mL/组},抗性平板每人1个（每组50mL）（
5、2）LB液体培养基：在95mLddH2O中加入胰蛋白腺lg、酵母提取物0.5g、NaCllg,用1M的NaOH调节pH=7.0,定容至100mL,分装入试管中，5mL/管，121°C,20min高压灭菌。（3）LB固体培养基：lOOmLLB培养基加入1.5g琼脂粉，高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55°C的水浴小，待培养基温度降到55°C时（手可触摸）加入AMP（终浓度100mg/L）,以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。一般10mL倒1个培养1111。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在
6、紫外下照10-15mino封口胶封边，并倒置放于4°C保存，一个月内使用。3、配制蛋白质电泳试剂（每组1块胶，可3-4组共用一套原液）（1）相关溶液：10%SDS（十二烷基磺酸钠）；0.1%漠酚兰溶液；聚丙烯酰胺溶液（30%T,3.3C%）：29.2g丙烯酰胺，0.8g双丙烯酰胺，定容100mL,过滤，避光保存；4x分离胶缓冲液：18.17gTris,10%SDS溶液4mL,pH8.8,定容100mL；4x浓缩缓冲液：6.07gTris,10%SDS溶液4mL,pH至6.8,定容lOOmL；2x
7、样品缓冲液：0.2422gTris,1.6gSDS,4mL甘油,2mL筑基乙醇，l.OmLO.l%澳酚兰，13mL三蒸水，PH6.8；10%AP：新鲜配制,0.1g过硫酸技+lmL双蒸水;1%TEMED；电极缓冲液：将6gTris,28$克甘氨酸和1克SDS加水溶解后，定容到lOOOmL,pH8.3；染色液：0.5g考马斯亮蓝R-250溶于90mL甲醇，90mL双蒸水，20mL冰醋酸；标准脱色液：75mL冰乙酸，875mL重蒸水与50mL甲醇混匀；PMFS溶液：lOmgPMFS溶于1mL异丙醇（
8、或无水乙醇）；PBS（pH7.4-7.6）：8gNaCk0.2gKCk1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800mL蒸馆水，用HC1调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸憎水定容至1L即可。注意:试剂配制一定要准确，否则影响后续试验结果。第二部分实验内容一、表达载体的转化与筛选（-）原理：1、转化原理：将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限
