生物工程细胞工程实验报告

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1、实验报告实验项目名称：水稻愈伤组织的诱导和分化实验项目性质：综合性实验所属课程名称：细胞工程班级：14生物工程2班学号：201430550215姓名：刘明新指导老师：陈忠正实验完成时间：2017年5月1日11目录1前言42材料与方法42.1仪器42.2设备42.3试剂52.4实验材料53实验方法53.1配母液53.2配NB诱导、分化培养基63.3高温高压灭菌63.4接种室、培养基及用具表面消毒63.5消毒剂的配制73.6种子去壳73.7外植体消毒73.8接种与观察（愈伤组织的诱导）73.9愈伤组织的再分化观察84实验结果84.1愈伤组织的诱导与分化84.2实验结果分析95讨论分析125.1

2、愈伤组织的诱导问题分析125.2愈伤组织再分化问题分析125.3操作分析13参考文献15111前言在我国,愈伤组织的培养和应用已经越来越多以及成熟，如：优良植株的无性繁殖、无病毒植株的获得、优良植株的选育等等。同时，随着消费者对产品安全性要求的日益提高，植物细胞培养的应用已愈来愈广泛，如：药用代谢产物的制造、作为天然食品或者食品添加剂、杀虫剂和杀菌剂、饲料等，不仅更安全，而且能很好地解决现今产品出现的各种问题。因此，愈伤组织的培养变得更加重要，而本实验则针对由水稻胚培养出愈伤组织的诱导形成幼苗的成功率进行了研究。愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生

3、子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。水稻成熟胚愈伤组织的诱导和再生是组织培养中的两个关键问题，它们涉及到外植体的脱分化过程和愈伤组织的再分化过程。影响水稻胚性愈伤组织形成和植株再生能力的因素包括基因型、外源激素、渗透压、外植体来源、固化剂、培养基其它成份以及温度、光周期和继代时间等多个方面，其中材料和外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素。植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。2材料与方法2.1仪器万分之一电子天平、百分之一电子天平、超净工作台、高压锅、酸度计、磁力搅拌器及搅拌子、不锈

4、钢过滤器、玻璃蒸馏水器、家用冰箱、超净工作台、培养室2.2设备烧杯：100ml×1，500ml×1；量筒：100ml×3，250ml×1；磨口试剂瓶：100ml×1，500ml×1；带盖试剂瓶：500ml×2；三角瓶：100ml×1，250ml×1，50ml×2(无菌)，1000ml×1；培养皿：￠9cm×1；药匙；称量纸；牛皮纸；棉花塞；橡筋：若干、枪形镊：11×4；无菌滤纸：（10cm×10cm）×5；2.3试剂1NHCL；02NKOH；蔗糖（分析纯）；琼脂粉；N6大量：KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、(NH4)2SO4；B5微量：KI、H3BO3、

5、MnO4·H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O；B5有机：盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、肌醇、谷氨酰胺、水解酪蛋白、脯氨酸、2、4－D、6-BA、NAA；75%酒精，2%NaCLO，无菌水(400ml)2.4实验材料水稻种子3实验方法3.1配母液3.1.1B5微量元素母液（1000×/100ml）按配方的1000倍用万分之一天平依次称量，搅拌溶解(溶解一种后再加另一种)后定容。用量极少的成分(如CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2MoO4·2H2O)即使按1000倍称量仍很困难

6、。3.1.2N6大量元素母液（10×）、B5有机成分母液（100×）配法同3.1.1。3.1.32，4-D母液(0.5mg/ml)用万分之一天平称取2，4-D50mg→用少量95%乙醇溶解→加水定溶为100ml。3.1.46-BA母液（1mg/ml)用万分之一天平称取6-BA100mg→用少量1N盐酸溶解→加水定溶为100ml。3.1.5NAA母液（1mg/ml)用万分之一天平称取NAA100mg→用少量95%乙醇溶解→加水定溶为100ml。3.1.6铁盐母液（1000×/1000ml）用百分之一天平称取FeSO4·7H2O27.8g，Na2EDTA37.3g→分别置于1000ml和500

7、ml烧怀，各加水500ml→加热搅拌，充分溶解→趁热混合，冷却装瓶。11以上各母液配好后分别装入磨口试剂瓶，贴上标签，写明名称、浓度和配制日期，置于4℃冰箱保存。3.2配NB诱导、分化培养基3.2.1诱导培养基N6大量+B5微量+B5有机+30g/L蔗糖+500mg/L谷氨酰胺+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白+2mg/L2,4-D+8.0g/L琼脂粉pH5.83.2.2分化培养基N6大量+B5微量+B5有