红芪多糖hps1—d的化学结构和抗补体活性研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果红芪多糖HPS1—D的化学结构和抗补体活性研究　　红芪系豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪HedysarumpolybotrysHand.-Mazz的根，为甘肃特产名贵药材，在中医理论中红芪用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，血虚萎黄，内热消渴[1]等。多糖做为红芪的主要活性成分有着特殊的生物活性，目前各种研究显示红芪多糖具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等功效[2

2、-7]。研究表明，一些多糖还具有抗补体的作用，能够抑制补体系统过度活化引发的炎症和损伤[8]。关于红芪多糖的抗补体活性研究未见报道。本实验从红芪多糖HPS1中分离出一种均一组分，对其结构和抗补体活性进行了研究。　　1材料　　BP211D型与BS224S型电子天平联盟；UV-1700紫外-可见分光光度计；DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱；KQ-3200DE超声波仪器；BS-100N自动部分收集器，BT100N数显恒流泵。CR22GⅡ离心机；FreezonePWS型真空冷冻干燥仪；透析袋；multiEA000元素分析仪；DawnHeleosⅡ型十八角度

3、激光散射仪；Waters00高效液相色谱仪UltrahydrogelTM1000，500色谱柱；GC01型气相色谱仪；GC-450，MS-320；OV-101毛细管色谱柱；600MHzInova00课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果NB核磁共振波谱仪；WellscanMK型酶标仪。单糖对照品：葡萄糖、甘露糖、木糖、半乳糖为BioSharp公司产品

4、、鼠李糖等为国产AR级。溶血素1∶000Sigma公司；三氟乙酸与二甲基亚砜购自Merck公司。纯水用MiliporeQ超纯水系统制得。2%绵羊红细胞、豚鼠血清均来自兰州大学实验动物中心。　　红芪样品购自甘肃武都，经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为多序岩黄芪H.polybotrys的根。干燥、粉碎后备用。　　方法　　提取与分离纯化粉碎的红芪药材，用95%乙醇回流3次，后用60℃水提取3次，提取液浓缩至生药浓度1g·L-1，加入95%的乙醇至乙醇浓度达到30%，在℃静置过夜，离心，收集沉淀，冷冻干燥得红芪粗多糖1。HPS1经Sevage法脱蛋白[9]和H2O

5、2除色素[9]后再次醇沉，透析，冷冻干燥。用水溶解后，经DEAE-cellulose柱色谱，用mol·L-1NaCl洗脱，苯酚-硫酸法示踪，收集主要馏分，后经SephadexG-100柱色谱，蒸馏水洗脱，得到HPS1-D均一组分。　　2.多糖的理化性质总糖质量分数的测定用苯酚硫酸法[10]，蛋白质含量测定用Bradford法[11]；糖醛酸的鉴定与质量分数测定使用气相色谱法和硫酸-咔唑法[10]；全波长紫外扫描；多糖中碳、氢、硫元素分析采用元素分析仪进行分析。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等

6、要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　2.单糖组成分析取HPS1-D样品10mg，采用GC分析[12]单糖组成。混合的单糖对照品直接乙酰化后GC分析。　　2.部分酸水解[10]取样品HPS1-D100mg用mol·L-1TFA100℃水解1h，冷却至室温后于60℃减压旋蒸除去TFA，加入甲醇溶解，减压蒸干，重复3次，除尽TFA。用蒸馏水溶解，透析。袋内部分经Sephadex-100柱色谱纯化后得到次级多糖组分HPS1-D-H；袋外部分经Se

7、phadex-25柱色谱纯化得一低聚糖HPS1-D-L和混合的单糖组分。将HPS1-D-H，HPS1-D-L水解后进行GC分析。.甲基化分析按Needs法[13]对HPS1-D进行甲基化反应。经IR分析检测甲基化完全后，用88%甲酸100℃水解h，然后加mol·L-1的TFA120℃水解h，去酸后还原，乙酰化，GC-MS分析。　　气相色谱条件：柱温17℃；载气为氦气；进样口温度210℃；载气体积流量mL·min-1；进样模式为分流；分流比；进样体积1μL。　　质谱条件：离子源温度200℃；接口温度210℃；溶剂延迟min；阈值1000；起始时间为min；

8、结束时间为；采集方式为Scan；扫描范围m/～。　　分析精密称取充分干燥的HPS