红芪多糖hps1―d化学结构与抗补体活性探究

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1、红芪多糖HPS1—D化学结构与抗补体活性探究[摘要]目的:红芪多糖HPS1-D的化学结构、初步构象和抗补体活性的研究。方法:红芪经水提醇沉法提取、Sevage法脱蛋白、H202脱色素、SephadexG-100色谱柱分离纯化得到均一的红芪多糖HPSHD。以GC、高效液相凝胶色谱法(HPLC-GPC)、凝胶渗透色谱-多角度激光散射仪联用法(GPC-MALLS)、元素分析、苯酚硫酸法、Bradford法、硫酸咔唑法研究其理化性质;采用甲基化、部分酸水解、以及酮R研究其连接方式、主链和支链结构及分支点状况;以GP

2、C-MALLS、对其构象进行初步分析;采用细胞溶血法对其抗补体活性进行研究。结果:HPS1-D主要由葡萄糖和阿拉伯糖组成,主链骨架由1,4和1,4,6-a-D-Glcp,侧链分支位于葡萄糖6位;侧链分支主要由1,5和1,3,5-a-L-Araf组成;相对分子质量为5.2X105,在0.9%NaCl溶液中为无规则线团;抗补体实验表明HPS1-D有一定程度的抗补体活性,并呈一定的剂量效应关系。结论:HPS1-D为1种新的中性红芪杂多糖,具有一定的抗补体活性。[关键词]红茂;多糖;结构;构象;抗补体[收稿日期]2

3、013-09-05[基金项目]国家“十二五”科技支撑计划项目(2011BAI05B02)[通信作者]*封士兰,教授,Tel:13993162172,Fax:(0931)8915686,E-mail:fengshl@lzu.edu.cn[作者简介]杨涛,硕士研究生,Tel:13919025203红茂系豆科岩黄茂属植物多序岩黄蔑HedysarumpolybotrysHand.-Mazz的根,为甘肃特产名贵药材,在中医理论中红芪用于气虚乏力,食少便溏,中气下陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,气虚水肿,痈疽难溃,血

4、虚萎黄,内热消渴[1]等。多糖做为红芪的主要活性成分有着特殊的生物活性,目前各种研究显示红芪多糖具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等功效[2-7]。研究表明,一些多糖还具有抗补体的作用,能够抑制补体系统过度活化引发的炎症和损伤[8]。关于红芪多糖的抗补体活性研究未见报道。本实验从红芪多糖HPS1中分离出一种均一组分,对其结构和抗补体活性进行了研究。1材料BP211D型与BS224S型电子天平(德国Sartorius公司);UV-1700紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);DHG-9075

5、A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒);KQ-3200DE超声波仪器(江苏昆山公司);BS-100N自动部分收集器,BT100N数显恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)。CR22GII离心机(日本日立);Freezone6PWS型真空冷冻干燥仪(美国LABCONCO);透析袋(截留相对分子质量3500,美国科技发展公司);multiEA4000元素分析仪(德国ElementarAnalysensysteme公司);DawnHeleosII型十八角度激光散射仪(美国怀雅特技术公司);Waters600高效液相色谱仪(美国

6、Waters公司)UltrahydrogelTM1000,500色谱柱(美国Waters公司);GC2014型气相色谱仪(日本岛津公司);GC-450,MS-320(美国Varian公司);0V-101毛细管色谱柱(兰州中科安泰分析科技有限责任公司);600MHzInova600NB核磁共振波谱仪(德国Bruker公司);WellscanMK3型酶标仪(ThermoLabsystems公司,芬兰)。单糖对照品:葡萄糖(Glc,Service公司)、甘露糖(Man,Dr.Ehrentorfer公司)、木糖(X

7、yl)半乳糖(Gal)为BioSharp公司产品、鼠李糖(Rha)等为国产AR级。溶血素1:4000Sigma公司(美国);三氟乙酸(TFA)与二甲基亚讽(DMSO)购自Merck公司。纯水用Milipore2Q超纯水系统制得。2%绵羊红细胞、豚鼠血清均来自兰州大学实验动物中心。红芪样品购自甘肃武都,经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为多序岩黄芪H.polybotrys的根。干燥、粉碎后备用。2方法2.1提取与分离纯化粉碎的红芪药材,用95%乙醇回流3次,后用60°C水提取3次,提取液浓缩至生药浓度1g•L-1

8、,加入95%的乙醇至乙醇浓度迗到30%,在4°C静置过夜,离心,收集沉淀,冷冻干燥得红芪粗多糖1(HPS1)。HPS1经Sevage法脱蛋白[9]和H2O2除色素[9]后再次醇沉,透析,冷冻干燥。用水溶解后,经DEAE-cellulose52柱色谱(2.6cmX70cm),用0.1mol•L-1NaCl洗脱,苯酴-硫酸法示踪,收集主要榴分,后经SephadexG-100(2.6cmX90cm)柱色谱,蒸馏水洗脱,

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