hbeag阴性血清中乙肝病毒前c区变异分析_1

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果HBeAg阴性血清中乙肝病毒前C区变异分析作者：郭龙华，黄宪章，庄俊华【关键词】,乙型肝炎病毒；变异；前C基因【摘要】目的了解本地区乙型肝炎病毒流行株前C基因的变异，为临床提供诊疗信息。方法通过设计2条特异性引物进行PCR扩增病人血清中PreC基因序列，回收PCR产物直接进行DNA测序和比对分析。结果PreC变异主要集中在nt1896位G→A。结论PreC变异可使HBeAg阴转。【关键词】乙型

2、肝炎病毒；变异；前C基因AstudyonthemutationsofprecoregeneofhepatitisBvirusgenomeineantigen-negativesera【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemutationsofprecoregeneintheeantigen-negativeseraofpatientswithhepatitisBvirusinfectionandprovideinformationfordiagnosisandremedyofthePrecor

3、egenewereamplifiedbyheminested-PCRfromeantigen-negativeseraandeantigen-postivesera，andthePCRproductsweresequenced，andthesequenceswereTherewasahotpointmutationinnucleotideposition1896G→AinprecoreThemutationsinprecoregeneancauseeantigenseroconversion.课题份量和难易程度要恰当，博士生

4、能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果【Keywords】hepatitisBvirus;mutation;precoregene乙型肝炎病毒是不完全双链环状DNA病毒，基因组全长约，为目前已知对人类致病的最小DNA病毒。HBV复制过程中要经过逆转录，由于逆转录酶缺乏有效的碱基校对功能，故HBV基因组比一般DNA病毒易发生变异。这给疾病的预防、诊断、治

5、疗和预后带来新的问题。有关HBV基因组的变异，近些年来一直是人们研究的热点。过去认为乙肝病毒e抗原阴转，表明病情向好的方面发展。研究证明，如果体内还有HBV在复制，HBeAg阴转往往是HBV在体内发生变异的结果，易使疾病慢性化。HBVPreC基因定位于乙肝病毒基因组nt1814-1900，PreC由于突变，提前出现终止子，HBeAg合成提前终止，影响干扰素疗效［1］。PreC是高变区，研究PreC的变异具有重要的临床意义。　1材料与方法材料血清标本来源于我院门诊和住院病人。主要仪器Roche公司LightCycler型荧光定

6、量PCR仪、飞鸽牌TGL-16B台式高速离心机。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果主要试剂广州达安基因公司HBVDNA荧光PCR定量检测试剂盒、蛋白酶K、平衡酚，裂解液。TaqDNA酶、dNTP、PCR产物直接回收试剂盒和DNAMarker。引物参照GenBank中的HBV基因组序列，用Primer软件设计2条特异性

7、引物：正义引物P1:5′-GACTCTCAGCAATGTCAACG-3′；反义引物P2:5′-TCATCAACTCACCCCAACAC-3′；由北京三博远志生物公司合成。设计PCR终产物431bp。方法标本采集收集30例HBeAg阴性标本和5例HBeAg阳性标本。HBVDNA的提取方法参照文献［2］。PCR扩增10×缓冲液5μl，P1、P2各2μl，dNTP1μl，TaqDNA酶1μl，MgCl23μl，模板6μl，ddH2O0μl。加石蜡油30μl，94℃min。然后94℃1min，53℃1min，72℃1min共循环35

8、次，72℃延伸5min。结果的观察及回收课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果取第