质粒dna的酶切鉴定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划质粒dna的酶切鉴定实验报告　　生物化学实验报告　　姓名：　　学号：　　专业年级：　　组别：　　生物化学与分子生物学实验教学中心　　实验名称质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定实验日期XX-12-11合作者评分　　实验地点指导老师　　第4实验室　　教师签名批改日期　　一、实验目的　　1.2.3.4.　　掌握PCR基因扩增的原理和操作方法掌握碱裂解法提取质粒的方法　　了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作　　二、实验原理　　、第一部分聚合

2、酶链式反应目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　1.PCR即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA的过程。　　1)2)　　加热使模板DNA，在高温下90℃-95变性，双链解链；　　降低溶液温度，使合成引物在低温，与模板DNA互补退火形成部分双链；3)　　溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用

3、下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。　　、第二部分质粒DNA提取与定量1.质粒　　1)　　独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子；　　2)存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。　　2.碱裂解法、　　1)2)3)　　基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；　　当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀去除。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了

4、解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3.离心层析柱　　1)　　硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸附蛋白质、多糖等物质；2)3)　　通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；　　低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。　　4.紫外光吸收法　　1)2)3)4)　　物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；而且物质对光的吸收是具有选择性的；各种不同的物质都具有其各自的吸

5、收光谱。　　因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。　　、第三部分酶切鉴定1.限制性内切酶　　1)　　限制性内切酶是DNA操作过程中所使用的基本工具；2)　　特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此切割双链DNA；　　3)分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的反向重复序列。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安

6、保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　、第四部分琼脂糖凝胶电泳1.天然琼脂　　1)　　天然琼脂是一种多聚糖，主要由琼脂糖及琼脂胶组成；2)3)　　琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷；　　琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。琼脂糖透明无紫外吸收，因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳。　　2.基本原理　　1)　　琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度；2)3

7、)　　DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动；DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带(迁移速度与分子量的对数值成反比关系)。　　三、材料与方法：　　实验材料1.目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个