微量凯氏定氮法实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划微量凯氏定氮法实验报告　　姓名***学号***系年级11级生物基地组别**同组者***　　科目细胞生物学实验题目蛋白质浓度测定日期　　蛋白质浓度测定　　【实验目的】　　1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理和方法。　　2.学会使用凯氏定氮仪。掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。　　【实验原理】目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大

2、潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　蛋白质是含氮的化合物。凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，硫酸铜起催化剂的作用。使用时常加入少量过氧化氢作

3、为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接收瓶内，硼酸接收氨后，形成四硼酸铵，然后用盐酸标准溶液滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。以甘氨酸为例，其反应式如下：　　NH2CH2COOH+3H2SO4→2C02+3SO2+

4、4H2O+NH32NH3+H2SO4→(NH4)2SO4　　(NH4)2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3↑　　反应，在凯氏烧瓶内完成，反应凯氏蒸馏装置中进行。蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量。凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数，即为蛋白质含量。　　【实验材料】　　1.试剂：牛奶；浓硫酸；CuSO4催化剂；标准品(NH4)2SO4；2％硼酸；/mlHcl；30％NaOH；甲基红指示剂。　　2.器材：　　图1微量凯氏定氮装置图2酸式滴定管　　1.电炉；2.蒸汽发生装置；3.

5、螺旋夹；4.小漏斗及棒状玻璃塞；　　5.反应室；6.反应室外层；7.橡皮管及螺旋夹；8.冷凝管；9.蒸馏液接收瓶此外还有三角瓶；移液管、5ml移液管；12.洗耳球；目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　13.大烧杯；14.吸管；15沸石；16.洗瓶；17.凯氏烧瓶；100ml容量瓶　　【实验步骤】　　1.样品消化　　

6、量取牛奶样品2ml于干燥的凯氏烧瓶中，加入3ml浓硫酸和200mg催化剂，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化。开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，当消化液呈淡黄色时，冷却，加入2滴H2O2，继续加热，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，取出冷却，冷却后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。　　试剂空白：向凯氏烧瓶内加入1ml蒸馏水，加入与样品消化相同的浓硫酸和催化剂，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试

7、剂空白消化液。　　2.仪器洗涤目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　在蒸气发生瓶内装如约三分之二的自来水，加甲基红指示剂数滴，再加入数毫升硫酸，直至溶液呈粉红色，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠防止暴沸。测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进口入加水适量通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子3，使反应

8、管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子7由橡皮管排出，如此数次。用蒸汽洗涤反应室约10min后，在冷凝管末端小玻璃管的位置放上一个盛硼酸-指示剂混合液的锥形瓶，将瓶倾斜，以保证冷凝管末端连接的小玻璃管完全浸于液体内。继续蒸馏1~2min。观察锥形瓶内溶液是否变色，如不变色，则证　　明反应室内部已洗涤干净；如果混合液变绿，说明定氮仪内有残留氨，没