微量凯氏定氮法,实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划微量凯氏定氮法,实验报告　　微量凯氏定氮法　　姓名：XXX年级：XX级生物基地班学号：XX同组者：XXX科目：生物化学实验实验时间：XX年6月3日　　一、【实验目的】　　1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法　　2．掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。　　二、【实验原理】　　天然有机物的含氮量常用微量凯氏定氮法来测定。生物材料的含氮化合物分析测定主要是指蛋白质，核酸的含量通常是用定磷法或别的

2、方法测定。蛋白质的含氮量几乎是恒定的，约在15~16%之间。因此只要测定蛋白氮，乘以，即为粗蛋白质含量。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂

3、，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，硫酸铜起催化剂的作用。使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受　　氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。　　在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。以甘氨酸为例，其反应式如下：　　反应，在凯

4、氏烧瓶内完成，反应凯氏蒸馏烧瓶中进行。蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量。凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数，即为蛋白质含量。　　三、【试验器材】　　1.牛奶　　2.凯氏定氮仪　　3.电炉　　4.消化架　　5.锥形瓶100ml　　6.量筒10ml(×1)　　7.滴定管目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　8.凯氏烧瓶　　9.玻璃珠　　10.吸耳球

5、　　11．移液管　　四、【实验试剂】　　1.牛奶　　2.浓硫酸　　3.硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾3份与硫酸铜1份混合研磨成粉末。　　4.30%氢氧化钠溶液：30g氢氧化钠溶于蒸馏水，稀释至100ml。　　5.2%硼酸溶液：2g硼酸溶于蒸馏水，稀释至100ml。　　6.混合指示剂：%甲基红乙醇溶液和%甲烯蓝乙醇溶液按体积比4:1混合。　　7./L标准盐酸溶液：用恒沸盐酸准确稀释标定。　　五、【实验操作】　　1．样品的消化目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保

6、障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　将两个50mL的凯氏定氮烧瓶编号，一只烧瓶内加蒸馏水，作为空白。另一只烧瓶内加入样液。然后用取样器各加浓硫酸4mL，用药勺加硫酸钾－硫酸铜混合物约200mg，所有试剂要尽量加到凯氏定氮烧瓶的底部。烧瓶口插上小漏斗，烧瓶置通风橱内的电炉上加热消化，注意先启动抽风机在消化开始时，应控制火力，不要使沸液冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，　　继续消化，直至消化液呈透明蓝绿色为止。消化时间为2～3h，冷却，准备蒸馏。在消化时可以同时进行第二步。　　2．定氮仪

7、的洗涤　　凯氏微量定氮蒸馏装置　　1.电炉2.蒸汽发生烧瓶3.玻璃管4.橡皮管6.反应室7.玻璃杯　　8.气水分离器9.冷凝管10.锥形瓶11.棒状玻璃塞12.废液排出管　　仪器应先经一般洗涤，再经水蒸气洗涤。　　蒸气发生器中装加有H2SO4的蒸馏水和数粒沸石，加甲基橙指示剂后显粉红　　色。加热后，产生的蒸汽经贮液管、反应室至冷凝管，冷凝液体流入接受锥形瓶瓶。每次使用前，需用蒸汽洗涤5分钟左右　　。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了