微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告材料

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1、实用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1.学习微量凯氏定氮法的原理2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术(未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等)二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。此过程进行的相对较为缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。

2、消化过程:文档实用蒸馏:在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热蒸馏,即可释放出氨气。反应方程式如下:吸收与滴定:蒸馏所放出的氨,可用硼酸溶液进行吸收,待吸收完全后,再用盐酸标准溶液滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色),最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。三、实验试剂、材料和器材实验材料:食用面粉。文档实用实验试剂:浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.01MHCL。实验器材:凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、

3、锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。四、操作步骤1.消化(1)准确称取1克食用面粉,用称量纸卷好小心送入至50毫升的凯氏烧瓶底部,切勿沾于瓶口或瓶颈上;(2)向另一烧瓶加入1ml水作空白对照;在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物(克氏催化剂)少许,浓硫酸10ml,小瓷片两粒,摇匀;(3)将烧瓶约60度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化;(4)在消化开始时,应控制火力,不要使液体冲到瓶颈;(5)待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透

4、明绿色为止;(6)消化完毕,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水10ml(注意慢加,边加边摇);文档实用(7)冷却后将瓶中内容物转入100ml的容量瓶中,并用蒸馏水洗烧瓶数次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。2.蒸馏(1)蒸馏器洗净后,开放水龙头P3,使水进入A室,水放至A室球部2/3处即可。(2)取3个50ml的锥形瓶,分别加入10ml硼酸(内加有混合指示剂)。用表面皿复盖备用。(3)加样①用移液管吸取2ml消化液,小心地由漏斗D倾入B室;②取一个盛有硼酸的锥形瓶,置于M管下,使管口恰好

5、接触硼酸溶液,用量筒从漏斗D加入30%氢氧化钠5ml,随即将P4夹紧,并往漏斗加入少量蒸馏水封闭。(4)蒸馏①用酒精灯加热,维持火力恒定,沸腾不可高于Y管口以免A室溶液从Y管倒吸,待第一滴蒸馏液从冷凝柱F顶端滴下时起,继续蒸馏5分钟;②然后将锥形瓶放低,使导管离开液面再蒸2分钟,最后用蒸馏水洗导管外壁,蒸馏完毕,取下锥形瓶准备滴定。(5)空白蒸馏文档实用①用移液管分别吸取2ml蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。LH仪器的洗涤:3.滴定(1)蒸馏完毕,用微量酸式滴定管,以0.01mol/L盐酸标准溶液进行滴定

6、锥瓶内溶液,溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色,即为终点。(2)记录所用盐酸的量。4.计算文档实用若测定的样品含氮量部分只是蛋白质则:式中:A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数;B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数;C为称量样品的克数:0.0100为盐酸的当量浓度(实际上,此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写);14为氮的原子量;6.25为常数(1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮)。五、实验结果序号称量样品(g)滴定样品用去的盐酸(ml)滴定空白用去的盐酸(ml)1115.20.122115.4文档实用若测定的样

7、品含氮量部分只是蛋白质,则:式中:A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数;B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数;C为称量样品的克数:0.0100为盐酸的当量浓度(实际上,此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写);14为氮的原子量;6.25为常数(1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮)。六、注意事项1.本法适用于0.05-3.0mg氮,样品中含氮量过高时,则应减少取样量或将样液稀释。文档实用2.勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时,需将吸管插至烧瓶底部再放样:如固体样品,可将样品卷在纸内,平插入烧瓶底部,然后再将烧

8、瓶直起,纸卷内的样品即完全放在烧瓶底部。3.蒸馏完毕,先将蒸馏出口离开液面,继续蒸馏1min,将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内,再将吸收瓶移开,最后移开酒精灯,绝不能先灭灯,否则吸收液将发生倒吸。4.硼酸吸收液的温度不应超过40°C,否则氨吸收减弱,造成损失,可置于冷水浴中。混合指示剂在碱性溶液中呈兰绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色。七、思考题1.写出一下各步的化学反应方程式:蛋白质的消化、氨的蒸馏、氨的滴定。答:蛋白质的消

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