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1、小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L6的克隆细胞株X淋巴道转移能力的测定实验大连医科大学基础医学院2011级临床8班段梦莹A110100259叶永英A110100255于舒晗A110100250刘晋宏A110100256小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L6的克隆细胞株X淋巴道转移能力的测定实验段梦莹¹，于舒晗¹，叶永英¹，刘晋宏¹，张宏颖²³（1大连医科大学基础医学院2011级8班辽宁大连1164002.中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,辽宁大连116023;3.大连医科大学病理学与法医学教研室,辽宁大连116044）摘要:[目的]
2、建立小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移细胞系HCa-P/L6细胞模型并将其单细胞克隆株接种于615小鼠脚垫培养检测其淋巴道转移能力。[方法]将小鼠腹水型肝癌淋巴道低转移细胞株(HCa-P)经615小鼠腹中线皮下接种的方法获得淋巴结转移瘤1代细胞HCa-P/L1,再经小鼠淋巴系统筛选5次,筛选高转移细胞系HCa-P/L6。615小鼠脚垫接种,检测单克隆细胞株淋巴道转移能力。[结果]从HCa-P中筛选出具有多部位转移特性的淋巴道高转移细胞系HCa-P/L6,转移率为100%。[结论]从HCa-P中筛选出了淋巴道高转移细胞系HCa-P/L6。关键词:HCa-P
3、；HCa-P/L6细胞模型；淋巴道；转移中图分类号:R286.91 文献标志码:A恶性肿瘤的转移是癌症患者死亡的重要原因。为了探索肿瘤转移的某些律，实验中从同一个肿瘤中分离出不同转移能力的克隆细胞,这对临床肿瘤治疗工作具有非常重要的意义。Hca-F是小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移单克隆瘤株,可用于肿瘤淋巴道转移机制的研究及抗肿瘤药物的筛选。1990年大连医学院病理学教研室从小鼠腹水型肝癌淋巴道转移细胞系Hca-F25/L中分离出具有淋巴道不同转移能力的两株瘤细胞,其中高转移克隆株HCa-F(16A_3-F_3)淋巴结转移率为78.6%～89.4%
4、,低转移克隆株HCa-P(A_2-0)淋巴结转移率为15%～15.4%¹],被广泛应用于肿瘤淋巴道转移机制研究及药物筛选。根据瘤异质性(Tumorheterogeneity)学说,恶性肿瘤的不同亚克隆细胞株在生长速度、侵袭能力、对生长信号的反应、对抗癌药物敏感性等方面都可存在差异。1992年,Chen等[3]对小鼠腹水型肝癌高(16A_3-F_3)、低(A_2-0)转移克隆稳定性进行了研究,结果提示,高转移克隆细胞株有效维持时间是在体外传20代以内。2003年,白洁等[4]对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移株HCa-F进行再克隆,结果分离出3个转移力不
5、同的瘤株。因此,为了给肿瘤淋巴道转移机制和中药活性成分筛选的研究提供一对可互为对照的转移力不同的肿瘤细胞,必须对低转移细胞株进行重新筛选。本文以小鼠腹水型肝癌淋巴道低转移细胞株HCa-P为瘤源,采取经体内淋巴系统筛选的方法,筛选具有高转移倾向的小鼠腹水型肝癌细胞系。但近来研究中发现此瘤株的淋巴结转移率不够稳定,考虑到肿瘤的遗传不稳定性,因此我们选择稳定性较强的小鼠腹水型肝癌淋巴Hca-P/L6-X细胞进行试验。通过可转移性小鼠腹水型肝癌淋巴Hca-P/L6-X细胞转移试验，研究其转移变化规律，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特征，了解肿瘤
6、动物实验模型建立的过程及意义并试图建立适用于研究肿瘤淋巴道转移实验模型，我们进行了本次实验。一、材料1.1研究对象1.1.1细胞系:小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L6的克隆细胞株X由大连医科大学病理学与法医学教研室张宏颖筛选。1.1.2实验动物:615种系小鼠,雄性,6～8周龄，体重18～22g，由大连医科大学实验动物中心提供(实验动物生产许可证SCXK(辽)2002-0002,实验动物使用许可证SYXK(辽)2002-0005)。1.2主要仪器及器皿：搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1
7、%来苏儿溶液、75%酒精棉、10%甲醛固定液等。二、研究方法2.1细胞系获取。从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞塑料冻存管，立即放入40度的温水中，一分钟内使冻存液全部融化，立即送入无菌室中。取出细胞悬液放入离心管中，用生理盐水洗涤2次，离心，弃上清，在加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHCa-F细胞悬液，于第6天无菌条件取腹水。2.2.615小鼠皮下接种肿瘤细胞。取615小鼠癌性腹水0.1ml（2×10^6个），接种于615小鼠右腋中线皮下。定期观察肿瘤生长及淋巴结肿大情况。于接种18天后处死全部小鼠，取瘤体及相关淋巴结
8、，同时观察肺、肝、肾等器官。将上述组织固定于10%甲醛固定液中，石蜡包埋制片，HE染色，显微镜检查。2.3.组织取材。将皮下瘤体、淋巴结
