小鼠肝癌细胞系hepa1论文

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1、小鼠肝癌细胞系Hepa1论文杨欣伟，隋延仿，李增山，曲萍，武文，叶菁，董海龙，张秀敏【关键词】癌症疫苗【Abstact】AIM:Tostudytheefficacyofantitumorimmunitybothinvivoandinvitrourinehepa16hepatocellularcarcinomacells.METHODS:pLXSNB7.1einductionandhightiterpositivecloneoleculesorimmunityinvivoandinvitroorvaccine.RESULTS:B7.1moleculesorinductiona

2、ndprotectiveimmunityeffect.CONCLUSION:Hepa16hepatocellularcarcinomacellstransfectedorvaccinecaneffectivelytriggerthehostantitumorimmunity.【Keyice;carcinoma,hepatocellular;B7.1;cancervaccines.【摘要】目的：研究小鼠肝癌细胞系Hepa16转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用.方法：采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA317包装细胞.freelLL-1新生小牛血清的DMEM

3、（高糖）培养基中，37℃,50mLL-1CO2条件下培养.包装细胞PA317和NIH3T3细胞培养条件同上，每4d更换液体１次，长满后传代处理.1.2.2重组逆转录病毒的获得及滴度测定用LipofectaMINE(Gibco/BRL)将质粒pLXSNB7.1转染至PA317病毒包装细胞系中，G418筛选阳性转染细胞，采用NIH3T3细胞为受测细胞，行滴度测定，以如下公式计算病毒滴度：Ｇ418R(cfuL-1)=(No.ofclonies)/［virusvolum(L-1)×replicationfactor×fractionofinfectedcellplated］1.2.

4、3转染肝癌细胞表面B7.1分子的表达情况用所获病毒上清进一步感染Hepa16细胞，G418筛选阳性克隆;用流式细胞仪检测Hepa16/B7.1细胞表面B7.1分子的表达.1.2.4转B7.1基因肝癌细胞的生长特性接种1×105转染前后细胞于24孔板中，每1例接种3个复孔，从接种第2日起对3个复孔进行细胞计数，取平均值，连续9d，第4～5日更换液体1次，绘制细胞生长曲线.1.2.5转B7.1基因肝癌细胞体内致瘤性将小鼠随机分3组，每组10只，分别于皮下接种肝癌细胞株Hepa16／B7.1，Hepa16/Neo和亲代Hepa16,细胞总数为5×106.每周2次用游标卡尺记录肿瘤

5、大小并观察小鼠生长情况.1.2.6转B7.1基因肿瘤细胞疫苗的制备及治疗实验①荷瘤鼠模型制备：于每只小鼠右背部皮下接种5×106亲代Hepa16细胞，共0.2mL.约7~10d后肿瘤结节长至0.5~0.6cm×0.5~0.6cm时开始治疗实验.②肿瘤细胞疫苗的制备：收集对数生长的Hepa16及Hepa16/B7.1细胞，调细胞数至5×109L-1，用100gL-1丝裂霉素C灭活2h，洗去丝裂霉素，用无血清RPMI1640调细胞数至2×1010L-1，备用.将荷瘤小鼠随机分为3组，每组10只，分别于对侧背部皮下接种Hepa16/B7.1、亲代Hepa16细胞及生理盐水，每周2

6、次，共6次，观察肿瘤大小变化及动物生存期.肿瘤体积用公式V=ab2/2计算.a为长径，b为短径.1.2.7转B7.1基因肿瘤细胞疫苗的免疫保护作用以丝裂霉素灭活的Hepa16/B7.1,Hepa16/Neo及亲代Hepa16肿瘤细胞作为疫苗免疫BALB/c小鼠，15d后接种未照射的亲本Hepa16细胞，观察小鼠成瘤情况及生存期.2结果2.1逆转录病毒的包装及转染肝癌细胞表面B7.1分子的表达情况用LipofectaMINE转染pLXSNB71至PA317细胞中，G418筛选得到多个克隆，选择高表达PA317株，用NIH3T3测定滴度，最高滴度为1.5×108CFUL-1.用

7、流式细胞仪检测Hepa16/B7.1细胞表面B7.1分子的表达（Fig1）.图1B7.1基因表达的FCM分析（略）Fig1FCManalysisofB7.1geneexpression（略）2.2转染肝癌细胞的生长特性转染的肝癌细胞与亲本Hepa16细胞在形态、生长速度及增殖能力上无明显差异,转染前后Hepa16细胞的生长呈上升曲线(Fig2).■:Hepa16;●:Hepa16/B71.图2转染前后Hepa16细胞生长曲线（略）Fig2GroentofHepa16cellsvaccinetransfectedar