小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影论文

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1、小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影论文.freelacell;vaccination;immunodefi-cientmice;Tlymphocytes;cytotoxicity;floetryAbstract:AIMToexploretheeffectofimmunecellsinvar-iousmicemuneongroanhepato-carcinomacellsinthesemiceandxenospecificcytotoxicityofthesemicetohepatocarcinomacells.METHODSThehu-ma

2、nhepatocarcinomacellsculturedbsinvariousmicemune（includingnormalimmunemice-BALB/c，Blympho-cytedeficientmice-CBA/N，Tlymphocytedeficientmice-BALB/cnudeandT，Blymphocytesbineddeficientmice-C.B-17SCID）andtheirgroice.I1640完全培养液置37℃，50mLL-1CO2孵箱中培养，到一定数量的对数生长期时，用2.5mgL-1胰酶（含2mgL-1的EDTA

3、）消化、离心、调整细胞数后接种到小鼠上.BALB/c小鼠15只，CBA/N鼠15只，BALB/cnude5只，皆为本中心繁殖的近交系或突变系实验小鼠，体质量18～22g，6～8周龄，雌雄兼用.其中CBA/N，BALB/cnude小鼠三级实验动物BALB/c为二级动物.C.B-17SCID小鼠15只从解放军军事医学科学院动物中心提供的三级实验动物，体质量15～18g，5～8周龄，用ELASA法检测无“渗漏”现象.全部实验小鼠都饲养在无特定病原体（SPF）条件中.1.2方法BALB/c和CBA/N各分为2组皮下组，用于不同癌细胞数量的接种;BALB/cnu

4、de鼠和SCID只有一组皮下，每组5只.另外BALB/c和CBA/N各5只分别用于重建SCID小鼠免疫.在无菌条件下操作，摘除小鼠眼球取血，常规Ficoll密度法分离淋巴细胞，用RPMI1640洗涤两次（1500rmin-1，10min），重新用RPMI1640悬浮，取1滴悬液与1滴2gL-1台盼蓝染液混合，于计数板上计数活细胞，调整细胞数2×1010L-1，于接种瘤细胞3d前给SCID小鼠ip0.4mL.以癌细胞3×1010L-1接种各小鼠右后肢臀部皮下0.2mL（包括SICD免疫重建组）.因BALB/c和CBA/N小鼠没成瘤，又以1×1011L-1

5、接种这两种小鼠右后肢臀部皮下0.2mL.SCID小鼠在接种瘤细胞前分别称重，各鼠接种癌细胞1LL-1乙醇浸泡，在超净台中无菌取脾脏，研磨制成脾细胞悬液，洗涤后用100mLL-1FCSRPMI1640调整1×1010L-1，内加高剂量IL-2（10万UL-1）和经5Gy照射的肝癌细胞（1×109L-1），加到24孔培养板中，于50mLL-1CO2孵箱中培养诱导5d.取对数生长期的癌细胞1×109L-1，加N512CrO43.7MBq于37℃孵育3h（每15min轻轻振摇1次），取出用100mLL-1FCSRPMI1640洗涤3次（800rmin-1，5m

6、in）重新悬浮，调整细胞数加入96孔培养板（每孔100μL含1×104细胞），同时每孔加100μL不同浓度的效应细胞，每份3个复孔，效靶比例为1001，501，251，12.51.最大释放组加入10gL-1TritonX-100100μL，自然释放组加100μL的完全培养液，在37℃CO2孵箱中培养4h.然后每孔取上清液100μL，于γ计数仪上测定cpm值，计算:特异性杀伤率（%）=（实验释放min-1-自然释放min-1）/（最大释放min-1-自然释放min-1）.1.2.2CD4+和CD8+T细胞百分率测定以3×1010L-1接种的CBA/N和B

7、ALB/c及正常相应鼠5in后，用Qprep自动细胞制备仪，加A，B，C液溶解红细胞和稳定淋巴细胞，再用PBS洗细胞1次，轻轻荡，立即上FCM（美国Coullter公司ProfileⅡ型）检测，于波长488nm计数1×104个淋巴细胞中各标记的T细胞数分数［8，9］.2结果2.1小鼠癌体生长以3×1010L-1接种小鼠皮下后，BALB/c和CBA/N鼠没出现癌细胞结节，而nude，SCID成瘤率达100%，且都随时间而增大;两种免疫重建SCID小鼠也有不同的癌结节表现，BALB/c-PBL-SCID癌结节到5IL-2Rlevelsinpatientse

8、dicalimmunology［M］.Shanghai:ShanghaiMedUnivPres