人肝癌细胞在免疫重建前后scid小鼠中的生长特点论文

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1、人肝癌细胞在免疫重建前后SCID小鼠中的生长特点论文.freelice;immunoreconstitution;hepatocarci-nomacell;immunecellAbstract:AIMToexploretheimmunoreconstitutionofSCIDmiceandtheaffectionofimmunityonhepatocarcinomacellgroanhepatocarci-nomacellsculturedinvitrobsofSCIDmicesubcutaneouslyandtheimmu

2、noreconstitutedSCIDmiceiceperipheralbloodlymphocytes（B-PBL-SCIDandC-PBL-SCIDmice）andtheirgroonitored.Thespleencellsofthesemice-inedfordirectcytotoxicitytothehepatocarcinomacells（tar-getcells）.TheimmunoglobulinconcentrationofB-PBL-SCIDmiceagglutinationofB-PBL-SCIDmi

3、cemunityinSCIDmiceembodiedtherejectioncharacteristicsofBALB/candCBA/Nmicetothehepatocar-cinomacells.Thereagroice，aofB-PBL-SCIDmicedisappearedaftercertaintime.ThespleencellsfromB-PBL-SCIDandC-PBL-SCIDmicedisplayedcertaincytotoxi-citytotargetcells，butthecontrolgroupg

4、eneratednolysistotargetcells.TheseraimmunoglobulinofB-PBL-SCIDmicehadthelevelofgL-1andgeneratedagglutinationormodelandstudyingtumorimmune.Carcinomagroiceiscorrelatedphcytes.0引言SCID小鼠是一种严重联合免疫（T和B）细胞缺陷的突变系小鼠，缺乏细胞和体液免疫，对异源性移植物产生的排斥反应很小，有利于肿瘤和肿瘤免疫的研究.国外已较普遍利用SCID小鼠进行肿

5、瘤免疫的研究［1］，国内也开张了一些研究［2］，但对免疫重建后的肿瘤免疫研究不够深入和具体.我们用BALB/c和CBA/N外周血淋巴细胞重建SCID（B-PBL-SCID和C-PBL-SCID）小鼠，将体外培养的人肝癌细胞接种到SCID，B-PBL-SCID和C-PBL-SCID小鼠的皮下，测定免疫重建后脾细胞毒力和B细胞产生的抗体水平，探讨SCID小鼠建立肝癌模型特点和免疫重建的免疫细胞与肿瘤生长之间的关系.1材料和方法1.1材料人肝癌细胞来源于实验动物中心建立的，经鉴定及100以上传代的人原发肝癌细胞系（HHCC-972

6、4）［6］;用含100mLL-1的小牛血清、10万UL-1青霉素和10万UL-1链霉素的RPMI1640完全培养液置于37℃，50mLL-1CO2孵箱中培养，传到一定数量的对数生长期时，用2.5mgL-1的胰酶（含2mgL-1的EDTA）消化、离心、调整细胞数后接种到小鼠.C.B-17SCID小鼠15只为解放军军事医学科学院动物中心提供的三级实验动物，体质量15～18g，5～8in-1×10），重新用RPMI1640悬浮，取一滴悬液与一滴2gL-1台盼蓝染液混合，于计数板上计数活细胞［7，8］，调整细胞数到2×1010L-1

7、，于接种癌细胞3d前给SCID小鼠ip0.4mL.SCID小鼠在接种瘤细胞前分别称质量，各鼠接种癌细胞1LL-1乙醇浸泡，在超净台中无菌取脾脏，研磨制成脾细胞悬液，洗涤后用100mLL-1FCSRPMI1640调整1×1010L-1，内加高剂量IL-2（10万UL-1）和经5Gy照射的肝癌细胞（1×109L-1），加到24孔培养板中，于50mLL-1CO2孵箱中培养诱导5d.取对数生长期的癌细胞1×109L-1，加N251CrO43.7MBq于37℃孵育3h（每15min轻轻振摇1次），取出用100mLL-1FCSRPMI1

8、640洗涤3次（800rmin-1，5min）重新悬浮，调整细胞数加入96孔培养板（每孔100μL含1×104细胞），同时每孔加100μL不同浓度的效应细胞，每份3个复孔，效靶比例为1001，501，251和12.51.最大释放组加入10gL-1TritonX-100100μL，自然释放组