人脐血干细胞在重症肌无力患者胸腺移植scid小鼠体内的分化

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterDifferentiationofhumancordbloodstemcellsinhumanmyastheniagravisthymus—SCIDmiceByLiLongtengSupervisor：Professor．DuYingProfessor．XuanXiaoyanImmunologyBasicMedicalCollegeMay2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本

2、论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第

3、一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日摘要人脐血干细胞在重症肌无力患者胸腺移植SCID小鼠体内的分化硕士学位申请人：李龙腾推荐导师：杜英教授轩小燕副教授郑9、i'l大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450001要背景和目的重症肌无力是一种典型CD4+T细胞依赖性的自身免疫性疾病。胸腺被认为是重症肌无力致病相关的重要器官，l临床上常用的治疗方法是胸腺切除术，MG患者胸腺切除后显示症状明显好转，AchR抗体在血清中的表达水平也明显降低。AchR抗体的诱导和持续不断的产生都依赖于T细胞，胸腺是T细胞的分化成熟和清除自身反应性T细

4、胞的关键器官。胸腺异常是MG患者是最常见的病理现象。约65％的MG患者发现胸腺淋巴滤泡性增生，胸腺瘤中也存在的约IO％MG患者中。MG胸腺增生的主要特征是大量的T细胞聚集在血管周围，而其他MG胸腺真正的上皮是萎缩的，反映出的是不成熟的双阳性细胞的百分比下降。增生的胸腺中另一个重要的病理特征是生发中心的形成，生发中心中B细胞数量增加，产生大量抗AchR抗体，参与MG的发生。只是仍然不清楚MG胸腺异常与T细胞发育和分化的关系，还不清楚MG胸腺异常对T细胞发育和分化的影响。人脐血干细胞是从足月顺产的新生儿脐静脉中采集到，与成人外周血不同的是人脐带血中含有丰富的原始干细胞，具有非常强

5、的向非造血系统分化的能力，所以脐血干细胞移植己广泛应用于多种疾病的治疗。有研究报道脐带血干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的影响，结果显示脐血干细胞参与调节免疫系统，为脐血干细胞治疗EAMG带来了新的希望。重症联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)由于无法进行VDJ重组，它们体内不能发育出成熟T和B淋巴细胞。有报告报道移植的胸腺小块组织在SCID小鼠的肾被膜内，增生繁摘要殖能持久的产生抗AchR抗体。因此，我们采用SCID小鼠模型，把MG患者胸腺移植到SCID小鼠肾被膜下，研究移植胸腺对人脐带血干细胞分化的影响，进一步揭示T细胞与重症肌无力发病机制的关系。材料与方法1．胸腺组织

6、移植SCID小鼠肾被膜48只重症联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)随机分成三组，每组16只。分别是MG胸腺组织移植组，正常胸腺组织移植组和人CD34+脐血细胞组。将来自MG胸腺组织移植于MG胸腺组织移植组SCID小鼠左肾被膜下。正常胸腺组织植入正常胸腺组织移植组SCID小鼠。人CD34+脐血细胞组为对照组不用做胸腺组织移植。SPF级分笼喂养，每日观察小鼠状况，并记录。2．静脉注射CD34+脐血干细胞取自健康产妇断脐后的脐带血分别用Ficoll一泛影葡胺溶液分离，免疫磁珠分选成CD34+脐血干细胞。用计数板计数，流式细胞仪检测细胞的纯度后备用。在胸腺组织移植两个星期后，给三组小鼠

7、静脉注射分选的CD34+脐血干细胞(3-5X106／mouse)，每组分别有10只继续喂养至60天。3．异种肿瘤细胞移植每组剩余6只SCID小鼠在注射CD34+脐血干细胞后30天，将培养的低分化胃癌BGC823细胞注射在小鼠的右肩部皮下(2×106／mouse)，每3天用卡尺测定量肿瘤的大小，并记录。4．组织学和免疫组织化学注射CD34+脐血干细胞后60天的10只SCID小鼠，麻醉后眼底静脉取血O．5ml。处死小鼠，取出肾脏和部分脾脏，将组织固定于10％中性福尔马林中，石蜡包埋，切片4Pm，分别进行HE