mtt法测定聚乙烯亚胺的细胞毒素,实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划mtt法测定聚乙烯亚胺的细胞毒素,实验报告　　MTT法测定细胞生长曲线　　1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x10、1x10、2x10、3x10、4x10、5x10/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。　　液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/17

2、2小时后。　　2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBS配)，继续孵育4h后终止培养。　　3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。　　4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。　　5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。　　MTT实验法测定细胞增殖　　1.实验材料目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可

3、提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　实验细胞株　　癌细胞株用含有10%新生小牛灭活血清RPMI-1640培养基，培养在37℃、饱和湿度、5%CO2的无菌培养箱中，每隔2～3天进行一次细胞传代。　　药物与试剂　　RPMI-1640培养基　　DMSO胰蛋白酶粉　　1-甲基乙内酰脲5-氟尿嘧啶　　MTT粉甘油　　碘化丙啶(PI)　　新生小牛血清　　仪器设备　　超净工作台超低温电冰箱恒温水浴箱低温高速离心机恒温震荡

4、摇动床　　-20℃电冰箱光学显微镜电子天平Eppendorf移液枪去离子纯水仪流式细胞仪低温数控高速离心机普通离心机　　主要试剂配方　　PBS溶液　　磷酸二氢钾(KH2PO4)、氯化钠(NaCl)、磷酸氢二钠目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　、氯化钾(KCl)，用去离子水(ddH2O)溶解，然后将其定容使总体积为。再使用盐酸将

5、PH值调至，用无菌盐水瓶分装好，高压消毒灭菌，4℃内保存。临用前要在37℃水浴加热。　　细胞培养基　　称取RIPM-1640培养基粉，用ddH2O溶解，再往溶液中加入2gNaHCO3，再用盐酸将PH值调整至，采用抽滤法除菌，无菌盐水瓶分装，置于4℃冰箱中保存，使用前往瓶中加入灭活新生小牛血清，使每瓶培养基中灭活新生小牛血清的浓度为10%。每次临用前要将含有10%灭活新生小牛血清的RPMI-1640培养基置于37℃水浴箱中加热。　　新生小牛血清　　临用前，将新生小牛血清置于56℃水浴中灭活30min，之后用无菌盐水瓶分装密封，再置于

6、-20℃冰箱中保存。　　胰蛋白酶　　在100ml的PBS溶液中加入胰蛋白酶粉，置于4℃冰箱中过夜，用直径为μm微孔滤膜除菌器除菌后分装、密封，置于4℃冰箱中保存。　　MTT溶液(5mg/ml)　　往50ml无菌PBS中加入250mgMTT粉，轻轻摇匀，使MTT粉充分溶解，予用直径为μm微孔滤膜除菌后分装、密封，锡箔纸避光，置于4℃冰箱中临时保存，置于-20℃冰箱中短期保存。　　4%多聚甲醛目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略

7、的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　称取多聚甲醛4g溶于50ml蒸馏水中，然后加热至70℃左右，用玻璃棒搅拌溶液使多聚甲醛充分溶解，然后往溶液中逐滴加入浓度为1mol/L的Na0H至溶液澄清，冷却，蒸馏水定容至100ml，用盐酸将PH调至，锡箔纸避光，置于4℃冰箱中保存。　　苏木精染液　　蒸馏水700ml，甘油300ml，苏木精5g，碘酸钠，冰醋酸20ml，硫酸铝钾500g。　　伊红染液　　蒸馏水100ml，伊红，氯化钙。　　1-甲基乙内酰脲溶液的配制　　1-甲基乙内酰

8、脲分子式为C4H6N2O2，分子量为，纯度>%，吸取适量该药物，加入少量PBS或生理盐水，配制成500mg·L-1的母液。-20℃保存，临用时稀释。　　5-Fu溶液的配制　　5-氟尿嘧啶分子量为，分子式为C4H3FN2O2，规格为250mg/10m