《创新实验》word版

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1、重庆医科大学大学生科学研究与创新实验项目申请书项目名称：探究Viperin与HBV的影响申请者：张浪生指导教师：单位：重庆医科大学电话：13368383014申请日期：2016年3月4日重庆医科大学实验教学管理中心研究项目项目名称探究viperin（抗病毒免疫因子）对通过使用AAV8为载体通过rAAV-1.3建立乙肝小鼠模型的抗病毒作用，以及Viperin与HBV的相互关系所属学科免疫学申请金额元起止时间20年月至年月项目性质学生自选研究课题（选其一）科研小组成员姓名性别年级电话及电子邮箱张浪生男2014级13368383014Jhnsoncqmu@gmail.com指

2、导教师研究内容和意义简介(400~50字)肝炎病毒感染极大多数都会发展成为慢性乙型肝炎，慢性乙型肝炎是全球常见的传染性疾病，病程长，治愈率低，个体差异大，成为巨大的健康负担。因此国内外对乙肝病毒的感染机制都进行的较多的研究，进过长时间的发展经过几十年的发展，免疫学取得了极大的突破，并且现阶段的研究也已经进入了分子研究的水平和阶段，而乙型肝炎防治也取得了极大的进步，研究表明，HBV的感染和损伤机制与免疫学有极大的关系，而其中对Viperin（Virusinhibitoryprotein,endoplasmicreticulumassociated,interferonin

3、ducible）的抗病毒机制有了较为深入的了解，基于大量的实验研究，本研究尝试探究Viperin与HBV之间的基本关系，据文献，在与宿主相互作用的长期进化过程中,某些病毒能够抑制细胞内Viperin的表达,逃逸其抗病毒功能，本实验试图通过动物实验的方式检测其感染HBV小鼠的viperin表达，另一方面，通过rAAV8-1.3HBV建立乙肝感染小鼠模型，通过检测相关的HBVDNA参数和(PCR手段)检测建模是否成功，根据目前国内外的研究，尽管Viperin与其他相关病毒的作用机理有了较为深入的认识，但在Viperin和HBV之间相互作用依旧是较为空白的一块，因此本研究可以

4、一定程度上弥补相应的空白并且可以为乙肝病毒感染免疫机制有更加深入的了解。一、立论依据(项目的研究意义和国内外研究现状分析，附参考文献)1研究对象乙型肝炎病毒HBV感染极大多数都会发展成为慢性乙型肝炎，慢性乙型肝炎是全球常见的传染性疾病，病程长，治愈率低，个体差异大，成为巨大的健康负担。Viperin（抗病毒免疫因子）毒感染宿主后，病毒核酸和蛋白质会激发机体免疫保护系统。机体先天性免疫保护系统作为抗病毒感染的第一道防线，会激活细胞内信号通路释放多种细胞因子，以抑制病毒的增殖，干扰素（Ｉｎｔｅｒ－ｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）作为其中重要的细胞因子之一，在机体细胞与病毒的相互作用中发

5、挥着重要作用。干扰素分为三种类型：Ｉ型干扰素（ＩＦＮ－α，β，ω，ε，κ），ＩＩ型干扰素（ＩＦＮ－γ）和ＩＩＩ型干扰素（ＩＦＮ－λ）［１］。干扰素通过结合细胞表面特异受体，诱导上千种干扰素刺激基因（ＩＦＮ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ，ＩＳＧ）的表达，其中不少具有抗病毒活性，被称为先天免疫因子。多年来，尽管人们不断探索干扰素在宿主与病毒相互作用中的机制，努力揭示先天免疫因子的作用机理，但迄今仅对少数分子的抗病毒机制有较深入了解，Ｖｉｐｅｒｉｎ即为其中之一［２］。Ｖｉｐｅｒｉｎ在细胞内的本底表达水平较低，但被多种物质诱导后表达显著增高，如Ｉ型干扰素、多种病毒、ＬＰＳ和ｐ

6、ｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）等。Ｖｉ－ｐｅｒｉｎ被诱导表达可概括为干扰素依赖和干扰素非依赖两种通路。抗ＩＦＮ－γ抗体能够完全抑制Ｖｉｐｅｒｉｎ表达等实验证明，干扰素在Ｖｉｐｅｒｉｎ诱导表达中起重要作用［５］。肝脏内NK细胞的数目在免疫耐受阶段相比于免疫清除和不活跃携带期有明显的增高[12]。它们表达活化型和抑制型受体。IL-10和TGF-β是维持免疫耐受的关键因素，IL-10调节NK细胞活性和功能，诱导T-细胞的抑制，从而抑制肝脏的免疫应答和免疫监视[13]。HBV持续复制的患者血清中存在较高浓度的TGF-β1，TGF-β1通过下调NK细胞上活化型受体NKG2D-DAP10和2B4

7、-SAP的表达，从而增加HBV的持续性复制，HBT患者的NK细胞由于缺乏这种双激活信号使其功能受损，细胞毒和分泌IFN-γ的能力下降，阻断NK细胞抑制性受体NKG2A，增加人NK细胞活性并清除小鼠的HBV感染[14-15]乙肝免疫耐受分子机制的研究进展*1，。由此我们得出由于IFN-γ的分泌能力下降，导致viperin分泌减少，由此我们得知乙肝病毒的复制与viperin的分泌存在一定的相关性。近年来，建立合适的乙型肝炎也取得了很大的突破，HBV作为一种嗜肝病毒都有较强的种属特异性和组织特异性，例如人乙肝病毒的自然宿主只有人类和非人灵长类（