《创新性实验》word版

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1、黄曲霉毒素和牛血清蛋白偶联产物的检测陈琳梅摘要：黄曲毒素B1是只有反应原性而无免疫原性的半抗原,不能直接刺激动物抗体,只有和牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)等载体蛋白连接后才能刺激动物分泌抗体,利用抗体制成胶体金试纸条快速检测黄曲霉毒素。将黄曲霉毒素肟化、与牛血清蛋白偶联反应的混合产物，以及黄曲霉毒素AFB1、牛血清蛋白BSA，分别经凝胶色谱分离后，选择波长检测色谱分离收集液，获洗脱曲线图。通过比较曲线的峰面积，判断黄曲霉毒素与牛血清蛋白交联结果以及它们的偶联率。关键词：黄曲霉毒素牛血清蛋白凝胶柱层析偶联Abstract：AFB1isaha

2、ptenthatonlyhasreactionogenicitybutnoimmunogenicity.Ttdoesnotstimulateanimalantibodiesdirectly.OnlyitconnectwithBSA,OVAandothercarrierscanstimulateanimalstosecreteantibodies.AndmakeantibodiesintocolloidalgoldteststriptodetectAFB1rapidly.OximatedAFB1mixingwithBSAcouplingreaction

3、,AFB1andBSApassbySephadexcolumnrespectivelyandseparatethem.Atlast,selectsuitablewavelengthtotestseparationmediumandgainelutingdiagram.BycomparingthecurvesofthepeakareastodeterminewhetherAFB1andBSAcoupledeachotherornotandtheircouplingrate.Keywords:AFB1BSASephadexcolumnchromatogr

4、aphcouple前言黄曲霉毒素（Aflatoxins）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少。产生的黄曲霉毒素主要B1，B2，G1，G2以及另外两种代谢产物M1，M2.其中M1和M2是从牛奶中分离出来的.B1，B2，G1，G2,M1和M2在分子结构上十分接近。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。特别是黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1，AFB1)除了有较强的急性毒性外，还有很强的慢性毒性，也是一种强致癌物质(CASTofUSA，1989)。黄曲霉毒素B1

5、常会污染植物和动物源性食品，被动物摄入体内后，还可转化成毒性也较大的黄曲霉毒素Ml等衍生物。黄曲霉毒素B1具有致癌、致畸、致突变作用，对人类健康构成巨大的威胁。加强对黄曲霉毒素B1的检测，对确保食品安全具有重要意义。世界上几乎所有的国家和地区都规定了食品及饲料中AFB1的最大允许含量并作为强制性标准进行检测和控制。为了防止AFB1超标的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链,加强对黄曲霉毒素B1的检测是必要的。薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法。薄层层析法灵敏度不高，特异性不强，易被其它荧光物质干扰，且分析时间较长；高效液楣

6、色谱法虽然灵敏度高，但检测仪器化程度高、设备昂贵，操作技术要求高，前处理净化要求高；免疫学方法由于其特异性强、灵敏度商，前处理简单，操作简便，比较容易推广使用。研制简便、快速、经济可行的黄曲霉毒素B1的检测方法，对于从源头上控制粮食黄曲霉毒素污染十分重要。黄曲毒素B1是只有反应原性而无免疫原性的半抗原,不能直接刺激动物抗体,只有和牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)等载体蛋白连接后才能刺激动物产生分泌抗体。故可采用免疫学方法，将黄曲霉毒素与牛血清蛋白偶联产物注射到小鼠体内，刺激小鼠产生抗体，利用抗体制成胶体金试纸条快速检测黄曲霉毒素，本方法就解

7、决了上述的问题。黄曲霉毒素AFB1与牛血清蛋白BSA偶联产物AFB1-BSA的检测，是建立免疫学快速检测农产品中黄曲霉毒素方法的一项重要工作内容。目前多采用紫外扫描的方法，根据吸收峰的变化判断偶联是否成功，但反应体系共存成分会产生干扰，影响检测判定结果的可信度。本实验用凝胶柱层析的方法对黄曲霉毒素与牛血清蛋白的偶联产物AFB1-BSA的检测方法，在识别黄曲霉毒素与牛血清蛋白偶联产物的同时，可给出偶联反应偶联率的具体数值，提高了检测判定结果的可信度，具有重要的实际应用价值。1.材料和方法1.1主要试剂葡聚糖凝胶G100（北京索莱宝科技有限公司），甲醇（

8、分析纯，国际集团化学试剂有限公司），黄曲霉毒素（以色列，FERMENTEK公司），牛血清蛋白（上海，生工生物