磁性纳米基因载体介导mcll特异性shrna治疗肝细胞癌的实验研究

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8、Ⅲ㈣㈣Y1918474原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：!生年丛月卫日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校●有权保留学

9、位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。◆作者签名：监蔓导师签磋鲤编期：丛年』月垒日.民L•••博士学位论文中文摘要摘要肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是最常见的一种肝癌。乙肝、丙肝病毒感染或肝硬化引发的慢性炎症最终往往导致肝癌的发生。肝癌是我国癌症中的第2号杀手，每年死亡人数约占全世界死于肝癌人数的53％。凋亡的调节机制非常复杂，人们对凋亡

10、调节基因，特别是其中的B细胞淋巴瘤／白血病基因．2(Bcelllymphoma／leukemia．2，Bcl．2)这一基因家族进行了深入的研究。髓样细胞白血病基因一1(myeloidcellleukemia-1，Mcl一1)是Bcl一2基因家族中重要的抗凋亡成员，也是肝细胞癌中目前已知的重要抗凋亡因子，因此研究Mcl．1基因在肝癌组织中的异常表达对了解肝癌发生的可能机制及抗肿瘤●治疗的可能途径有重要意义，是未来抗肿瘤治疗策略中的一个新靶点。RNA干扰技术(砌蛆i)是近年发展起来的新技术，RNAi

11、引发的基因沉默作用是特异的和有效的，具有抑制作用强、稳定性高、细胞摄取相对容易等优点，为肿瘤的基因治疗提供新的、有前途的手段。是当前基因治疗研究最广为应用的基因沉默工具。小干扰RNA(siRNA)选择性抑制基因表达使基因治疗达到最大的特异性，但是弱小的细胞内导入能力、有限的血液稳定性及非特异的免疫原性阻碍了si对临基因治疗的发展。相比普通的siRNA，具有短发卡结构的●shR．NA产生的RNAi效应更强，但国I内J'l-的研究都没能有效解决将si鼬姒导入体内细胞的转染效率低下的问题。基因转运需要

12、合适的载体，理想的基因转运系统，应具有较高的T博士学位论文中文摘要基因转染效率、良好的靶向性和生物相容性、较高的稳定性及生物可降解性。目前的病毒载体和非病毒脂质体载体都存在不同程度的缺陷，因而寻找一种理想的基因载体就成为当务之急。纳米基因转运体的研制是目前国际纳米生物和肿瘤基因治疗研究领域重要的前沿性课题。纳米粒与DNA的连接多通过静电吸引作用来完成。DNA的磷酸骨架所带的负电荷只能与表面带正电性的载体结合。因此，需要利用生物活性分子对纳米颗粒的表面进行改性，使其表面携带阳离子物质，以起到防止纳

13、米颗粒团聚，并有利于结合DNA分子的作用。Fe304磁性纳米粒兼具有磁靶向和被动靶向的特点，可以通过在其表面进行氨基功能化修饰，增加其稳定性和转染效率。基于以上背景和已有的研究成果，我们先用免疫化学Envision●法测定抗凋亡因子Mcl．1在肝癌组织及癌旁组织中的表达，探讨凋亡机制失衡导致肝癌的发生的关系及I晦床病理学意义。结果显示，与高分化的肝癌组织相比，在低分化、增殖旺盛的肝癌组织中Mcl．1蛋白表达显著增强，62例肝癌组织中，Mcl．1阳性表达率为64．5％，高于临近癌旁组织，且与肝癌E

14、dmonsongrade分级、肿瘤直径、肝内外转移有关(P

15、肝癌HepG2细胞后，HepG2细胞Mcl．1mRNA含量较转染前及对照组均有明显的下降(尸