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1、白念珠菌生物膜模型的建立及其对漱口水抗性的研究离子交换与吸附,2010,26(6):490～496IONEXCHANGEANDADSoRPTIoN文章编号:1001—5493(2010)06.0490—07白念珠菌生物膜模型的建立及其对漱口水抗,陛的研究熊开容2钟朗丁2吴丁财符若文1聚合物复合材料及功能材料教育部重点实验室中山大学化学与化学工程学院,广州5102752广东工业大学环境科学与工程学院,广州510006摘要:建立自念珠菌生物膜的体外模型,观察漱口水对不同发育时期生物膜的影响.以白念珠菌
2、国际标准株ATCC1023l为研究对象,将玻片置于培养皿形成生物膜,选取3种常见漱口水对不同阶段的白念珠菌生物膜的影响进行评价.结果显示,白念珠菌可以在玻片上形成几个典型时期的生物膜,建立的白念珠菌生物膜模型可用于观察抗菌剂对生物膜的影响,以进行抗菌剂的抗菌性能评价研究.实验还发现,中晚期的白念珠菌生物膜比早期的对漱17水更具抗性.关键词:白念珠菌;生物膜模型;抗菌性能评价;漱口水中图分类号:R168文献标识码:A1前言目前抗菌高分子的研究较为活跃,随着高分子抗菌剂的研制开发,抗菌高分子抗菌性能评
3、价方法的建立也日趋迫切.但由于这一新型功能高分子发展时间较短,对其评价标准的建立还处于初级研究阶段【l】.现有的抗菌剂抗菌性能检测标准是以游离于液体培养基中的细菌与真菌的单细胞状态作为研究对象,这虽然在最大程度上简化了外界环境对实验结果的影响,但越来越多的研究证实,在自然状态下,微生物很少以这种纯培养基中的游离形式存在,生物膜才是细菌最常见的生态环境和生存方式【2.J.生物膜是附着于无活力或活组织表面的,由其自身产生的细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)包裹的有结构的菌细胞
4、群体,是细菌在自然界存在的主要形式[4】.实验证明,细菌生物膜的耐药性通常远高于游离菌.细菌生物膜引起的耐药性的研究目前主要集中在生物膜的基础研究和临床研究,所报道的生物膜的抗菌性能研究多源于医学领域,而有关抗菌剂的生物膜抗菌性能评价方法的研究报道较少.汪长中等利用xTT减低法,以96孔板为载体研究了牡丹皮水煎剂对白念珠菌生物膜{收稿日期:2010年1月19日项目基金:国家基金项目(50673101),广东省科技计划项目(0711020600015)作者简介:熊开容(1975～),女,讲师,博士研
5、究生.通讯作者E—mail:cesfrw@mail.sysu.edu.ca第26卷第6期离子交换与吸附的作用,发现牡丹皮水煎剂对白念珠菌有一定的抑制作用,且明显呈剂量依赖关系I6】.徐颖,李福明研究了3种根管消毒药物对白念珠菌生物膜的作用效果,结果表明中药五倍子对白念珠菌生物膜初期阶段具有抑制作用J.SuzanneB.I.Luppens等人建立了金葡菌生物膜的抗菌性能测试方法J,他们在玻璃,不锈钢和聚苯乙烯等材料上构建生物膜,并对两种抗菌剂苯扎氯铵和次氯酸钠进行抗菌性能测试,结果发现,生物膜中的金
6、葡菌对上述两种抗菌剂的抵抗力是菌悬液中游离菌的50—600倍.相对于生物膜在基础医学和临床广泛深入的研究而言,生物膜的抗菌性能测试方法的建立研究还远远不够,一方面不能及时将生物膜的新近研究成果应用于抗菌剂的检测,另一方面,现有的生物膜的抗菌性能测试方法还不完善,还不能应用到抗菌剂的抗菌性能检测标准上.因此,迫切需要建立抗菌剂抗菌性能体外生物膜实验方法,以便为抗菌剂的抗菌性能提供更真实有效的评价体系.目前的生物膜实验多需用到恒化器,但国际上先进的恒化器系统结构复杂,本实验利用现有的技术条件,尝试建立
7、符合国情的生物膜体外模型,以便简单快捷地进行抗菌剂抗菌性能的测试.由于白念珠菌是口腔中微生物的重要成分之一,是口腔常见的条件致病菌,同时白念珠菌ATCC10231菌株还是国际上作为消毒效果评价的标准菌株,因此,本文首先构建白念珠菌生物膜,选用在市场上较为常用的3种漱口水进行白念珠菌ATCC10231菌株生物膜作用的体外评价实验.2实验部分2.1实验细菌实验菌株采用白念珠菌(ATCC10231),购于广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心.2.2试剂葡萄糖,蛋白胨,琼脂,磷酸氢二钠及磷酸二氢钾均从广州
8、市纤会化玻仪器有限公司购买;漱口水A,漱口水B和漱口水c从广州日用化学品有限公司购买.沙堡琼脂培养基:葡萄糖40g,蛋白胨lOg,琼脂20g,加入1000mL蒸馏水,加热至完全溶解,调pH至5.6±0.2;沙堡液体培养基:葡萄糖40g,蛋白胨10g,加入1000mL蒸馏水,加热至完全溶解并将pH调至5.6__-0.2:磷酸盐缓冲液(PBS):磷酸氢二钠7.134g,磷酸二氢钾1.36g加入1000mL蒸馏水,调pH至7.2.以上培养基及缓冲液均由本室配制.2.3生物膜的构建在无菌的
