电针调节ras-raf-mek12-erk12信号通路抑制软骨细胞凋亡的机制研究

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1、论文质量承诺书本人承诺：所交的学位论文均按答辩专家意见进行认真修改，文字和图表均无错误，内容真实可靠，并经导师审核确认，最后定稿、装订成册，论文书写和格式均按新修订的《福建中医药大学关于研究生学位论文格式的规定》要求。本人愿意对论文的质量负责，且文责自负。专业：针灸推拿学学号：1120130002承诺人签字-臌2。压年5月厂善曰导师承诺：本人已认真审核研究生的学位论文，该论文是在导师指导下由研究生完成。并已按答辩专家意见进行修改，文字和图表均无错误，内容真实可靠．论文书写和格式均按新修订的《福建中医药大学关于研究生学位论文格式的规定》要求。本人

2、承诺研究生所交的论文为最后定稿论文，并对论文质量负责：导师签字：20{S年5-月／彦目万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。据我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得福建中医药大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由学位论文作者签名签字日期：00／r车∥月∥日权使用授权书本学位论文作者完全了

3、解福建中医药大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属福建中医药大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权福建中医药大学可以公布学位论文的全部或部分内容，并编入有关数据库进行检索，可以允许采用影印、‘缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文(保密的学位论文在解密后遵守此规定)。l、本学位论文属于(必须在以下相应方框内打“巾，否则一律按“非保密论文”处理)：(1)保密论文：口本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。(2)公开论文：翻本学位论文不

4、属于保密范围，适用本授权书。2、是否同意授权以下单位(必须在相应方框内打“小，否则一律按“同意授权”处理)：1、囱同意授权口不同意授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”将本人学位论文进行电子和网络出版，并编入CNⅪ系列数据库(《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》和《中国知t；!资源总库》)。r2、曰同意授权口不同意授权、中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并保留在其他媒体发表论文的权利。本人签名签字日期：2口／锋5月ig日导师签名签字日期泣孵5月／孑日万方数据卿目录中文摘要．．IVAbstract．．

5、．．．．．．．．．．．VI前言．1第一部分理论探讨3第二部分TNF一Ⅱ诱导软骨细胞凋亡模型的建立及鉴定．．9引言91实验材料一92实验方法与步骤．102．1软骨细胞的分离、原代培养．102．3．1II型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞．．113结果．113．1软骨细胞的形态观察．113．2软骨细胞的II型胶原免疫组化鉴定．．124讨{仑．135小结．15第三部分电针干预软骨细胞Ras—Raf-MEKl／2．ERKl／2信号通路的体外实验研究16引言162实验方法与步骤172．1电针后血清的制备．172．4DAPI染色观测各组软骨细胞的凋亡．．1

6、83结果．2l3．1电针后血清干预TNF．0t诱导软骨细胞活性的量效关系213．2电针后血清干预TNF．a诱导软骨细胞的形态观察2l3．4电针后血清抑制TNF．a诱导软骨细胞的相关蛋白表达224讨{念．245小结．26结论27参考文献一28II万方数据致谢一36文献综述37作者简历．．43III万方数据中文摘要目的探讨电针调节Ras．Raf．MEKl／2一ERKl／2信号通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。方法1．基于国内外的相关文献，以电针干预骨性关节炎的文献为研究对象，采用综合一分析一归纳的方法，探讨电针调节骨性关节炎软骨细胞功能改变相关信号通

7、路及调控因子的可能作用机制。2．清洁级4周龄SD大鼠，采用机械一II型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞，并用TNF．0【诱导建立软骨细胞的凋亡模型，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，II型胶原免疫组化鉴定软骨细胞，MTT检测软骨细胞的活性，DAPI检测软骨细胞的凋亡情况。3．SD鼠30只，分为空白组、对照组、实验组，电针干预后，制各电针后血清。培养第2代软骨细胞，采用10％空白组血清培养；模型组，采用TNF—c【20gg／L+10％空白组血清；对照组，采用耵盯．C【20lag／L+10％对照组血清；实验组，采用7rNF—a20gg／L+10％

8、电针后血清，干预48h后，DAPI染色检测软骨细胞凋亡率，MTT检测各组软骨细胞的活性，WesternBlot检测Ras、Raf、MEKl／2、ERK