补肾法、疏肝法对体外培养ivf-et患者卵巢颗粒细胞中acta及其smads信号通路的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。～签名濑仟翮擗梅：阐矽侈年弓月弓D日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和

2、致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生繇＼司萄午勒撼乖彩矽『夕年乡月?7Et万方数据IIIIIIIMUlIIIIIIIIIIIY2785526目录中文摘要．．1英文摘要．．6英文缩写。．13研究论文补肾法、疏肝法对体外培养IVF．ET患者卵巢颗粒细胞中ACTA及其Smads信号通路的影响前言日U舌．．1珥．．14材料与方法．．15结果．．23附图．．26附表．．44讨论．．50结论．．58参考文献．．59综述ACTA在生殖医学

3、中的研究进展62致谢．72个人简历．．73万方数据中文摘要补肾法、疏肝法对体外培养IVF．ET患者卵巢颗粒细胞中ACTA及其Smads信号通路的影响摘要目的：前期研究证实，补肾法、疏肝法具有提高体外受精一胚胎移植(invitrofertilization．embryotransfer，IVF．ET)患者临床妊娠率、改善妊娠结局、提高卵母细胞质量的作用，本研究拟通过观察补肾法、疏肝法对IVF．ET忠者体外培养卵巢壁颗粒细胞ACTA及其信号通路的调控作用，以探讨两法促进卵泡发育、提高卵母细胞质量作用机制及其途

4、经的异同。方法：l含药血清制备补肾调经方、逍遥散方含药血清：选取年龄在20．30岁，身体健康，月经规律，B超显示有成熟卵泡，且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者10名，分别服用补肾调经方和逍遥散方。补肾调经方、逍遥散方服用方法是每日1剂，300ml，早晚分服。补肾调经方和逍遥散方连续服药3天，第4天清晨空腹服用全天剂量药物(服药前禁食12h)，于末次服药1h后静脉取血5ml，室温静置2h，3000r／min离心lOmin，取上清，56℃水浴30min灭活补体，0．22pro无菌滤器过滤除菌、分装制备补肾调

5、经方、逍遥散方两种人含药血清。正常血清：选取年龄在20．30岁，身体健康，月经规律，B超显示有成熟卵泡，且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者5名，清晨空腹静脉采血5ml，同上制备正常人血清，设为正常血清对照。以上血清均．20℃保存备用。2卵巢壁颗粒细胞培养将含有颗粒细胞的卵泡液经梯度离心后获得壁颗粒细胞，于35mm培养皿中置2ml培养液，37。C、5％C02(VⅣ)、100％湿度培养，24h后细胞贴壁。分别加入补肾调经方和逍遥丸含药血清，分为补肾组和疏肝组，补肾含药血清组与疏肝含药血清组分别设置低、中、高

6、三个剂量组，正常血清为正常组，不加血清为空白组。继续培养24h后，收集颗粒细胞。第一批采用机械方法收集颗粒细胞，置于．80。C保存备用(用于实时荧光定万方数据中文摘要量PCR)。第二批采用机械与酶结合的方法，迅速放入2％多聚甲醛中固定(分别用于免疫组化和免疫荧光)。补肾高剂量组与疏肝高剂量组在中药孵育24h后，加入SB431542(浓度为10pmol／L)，继续孵育2h，分别为补肾阻断剂组和疏肝阻断剂组，收集与实验方法同上。采用实时荧光定量PCR检测ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad

7、3、Smad4mRNA的表达；采用免疫组化法、免疫荧光法检测颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4以及P．Smad2、P．Smad3蛋白的表达。结果：1体外培养各组卵巢壁颗粒细胞ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4mRNA的表达1．1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4mRNA表达比较正常组较空白组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、S

8、mad3、Smad4mRNA表达升高(尸<0．05)。与空白组、正常组比较，疏肝低、中、高剂量组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4mRNA表达均升高(均P<0．05)；且疏肝高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4mRNA表达高于疏肝中剂量组及疏肝低剂量组(均P<0．05)；疏肝中剂量组表达高于疏肝低剂量组俨