补肾疏肝法对卵巢早衰模型小鼠的作用研究

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1、补肾疏肝法对卵巢早衰模型小鼠的作用研究王秀贤李群(邢台县第三医院054001)【中图分类号】R711.75【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)19-0166-02【摘要】目的探讨补肾疏肝中药复方对实验性的卵巢早衰(POF)的防治作用o方法将自身免疫性POF模型小鼠分为模型组和中药治疗组，治疗组在3次免疫后连续灌服中药复方，分析灌服中药后阴道脱落细胞涂片,外周血雌二醇(E2)浓度及受试动物卵巢滤泡和黄体数改变情况。结果中药治疗组小鼠体内血清E2水平均比模型组高。卵巢组织形态学分析显示，中药治疗组牛长滤

2、泡和黄体数均比模型组明显增加(P<0.05)o结论补肾疏肝中药复方可使卵巢内残存的少数滤泡得以复苏，恢复部分卵巢功能。【关键词】卵巢早衰补肾疏肝雌二醇卵巢早衰(prematureovarianfailure,POF)是指月经初潮年龄正常或青春期延迟、第二性征发育正常的女性在40岁之前出现闭经，其FSH和LH持续在40IU/L以上，FSH升高更明显，雌二醇(E2)常低于50〜70pmol/L,孕酮(P)低于2nmol/L的一种综合征。卵巢早衰常伴随其他内分泌自身免疫疾患，故其治疗比较困难[1-3]o如何减缓卵巢功能衰

3、退的速度以恢复卵巢功能，提高牛活质量,是目前牛殖内分泌临床研究的一项重要课题。木研究给予实验小鼠连续灌服中药复方水煎剂，分析其牛殖内分泌及卵巢形态学改变,以期探讨补肾疏肝方药防治POF动物模型的作用机制，为临床中药治疗POF提供理论及实验依据。1材料与方法1.1造模及给药7〜10周龄雌性小鼠40只，体重20-23g,由河北医科大学实验动物中心提供。均经阴道脱落细胞涂片筛查性周期正常。随机分为2组，模型组和中药治疗组，每组20只。各组小鼠均于双后脚掌掌心处进行皮下注射，每只小鼠注射液体0.1ml,注射CFA-Pzp3混合液

4、，其中包含CFA0.05ml,Pzp350nmolo每次免疫间隔2周,并且加强免疫2次。中药治疗组从第3次免疫后开始灌服中药水煎剂。剂量均相当于临床等效剂量的10倍(0.2ml/10g)o1.2药物及试剂补肾疏肝复方由熟地、枸杞子、覆盆子、淫羊董、当归、山药、香附、红花、川茸等组成，并制成相当生药200%浓缩液。小鼠透明带3(PZP3)由杭州中肽生化有限公司合成,弗氏完全佐剂(CFA)购自美国Sigma公司。1.3生殖内分泌指标每天早、晚&00各一次取小鼠阴道脱落细胞涂片，于光学显微镜下观察其性周期。在第3次免疫后17天

5、取眶静脉血，并用颈椎脱位法处死小鼠，同时取卵巢待测。1.4自身免疫性卵巢炎组织形态学观察收集的卵巢经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片常规HE染色,在光学显微镜下计数黄体及各个吋期滤泡数量，取平均值。1.5统计学分析计量资料行均数t检验;计数资料行χ2检验。2结果2.1阴道脱落细胞涂片小鼠正常性周期一般为4〜5天，包括动情前期(9-18h).动情期(6-12h).动情后期(30-48h)和动情间期(36-42h)o免疫后2周，模型组小鼠性周期紊乱，表现为性周期延长(至7・10天)，甚至持续停留在动情期，与中药

6、治疗组相比差异显著。证明模型组小鼠的卵巢内卵泡发育延迟、不发育或卵泡不能成熟排卵。经中药治疗后小鼠恢复正常性周期。2.2各组E2含量比较中药治疗组E2含量比模型组显著升高，比较有显著性差异(P<0.05)。2.3自身免疫性卵巢组织炎形态学分析见表2。中药治疗组黄体数目明显增加(包括新形成的黄体)，与模型组比较差异有显著性(P<0.01);生长滤泡大部分仍受到破坏，但滤泡数量明显多于模型组(P<0.01)o2.4E2含量与滤泡数的相关性分析灌服中药后，实验鼠血清E2含量升高及生长滤泡数增加，二者之间呈明显

7、正相关(r=0.74,P<0.05)o表1各组血清E2含量比较组别nE2(pg/ml)中药治疗组2017.68±3.24模型组2012.35±2.98表2各组小鼠卵巢滤泡及黄体计数比较组别n始基滤泡初级滤泡生长滤泡黄体中药治疗组202.23±1.635.42±1.0513.98±2.352.18±1.64模型组201.54±1.304.61±1.229.68±3.240.75±

8、0.653讨论卵巢早衰的患者在40岁之前出现闭经、不孕不育及一系列更年期表现，如潮热、烦躁失眠、性交困难、骨质疏松等，在治疗上常以激素替代治疗为主，因其效果的局限性及有导致癌症等副作用，急需探索新的治疗方法。本病在中医古籍中并无记载，而是分散于“血枯”“闭经”“不孕”等病证范畴。中医脏腑学说认为肾主生殖，肾藏精,精生