line 1非编码区5utr对肿瘤相关mirna及其靶基因的调控作

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1、中文摘要摘要：近年来随着非编码序列研究的逐渐深入，发现越来越多的非编码序列有着重要的功能，同时在肿瘤分子发病机制和人类疾病治疗方面的作用被大量证实。在这些非编码序列中，重复序列占很大的比重，这些重复序列大部分是移动元件，包括转座子和逆转座子。在逆转座子中有二种长散布重复序列LINEs，LINEl是LINEs的重要组成成分，LINEl包含两个开放阅读框OI江1、ORF2和两个非编码区域3’UTR、5’UTR。非编码区5’uTR序列是一个双向启动子，正向启动子从obp开始，反向启动子从400bp开始，400bp至680bp之间的这段序列对启

2、动子的活性有很大的影响。在绝大多数情况下，LINEl是以5’截短的形式存在，同时LINE．1的启动子为高度甲基化状态，造成其沉默，但生殖细胞发育、胚胎发育的早期以及肿瘤细胞中则为激活状态。这提示LINEl的激活可能涉及肿瘤发生的共同机制。国内外的一些文献报道对LINEl开放阅读框的研究较多，但对其非编码区3’UTR、5’UTR还知之甚少。非编码I斟A尤其是miI淑A在最近几年也引起了大家的关注，它通过诱导mRNA的切割降解，与靶mRNA的序列互补，引起翻译抑制或其他形式的调节机制抑制靶基因的表达。迄今已经发现并命名了超过9500个miR

3、NA，参与细胞的生长、分化和细胞周期调控多个环节【5】，其中50％位于与癌症相关的染色体区域或易断裂位点。有研究者认为miRNA可以作为肿瘤易感基因的候选基因。这些发现说明有很多未知的miRNA在真核细胞的调控中以及肿瘤的发生中发挥重要作用。同时miIⅢA作为癌基因或抑癌基因使人们对它的研究兴趣与肿瘤分子发病机制相关联，对肿瘤的发生和发展有着重要的影响。本文旨在将两者结合起来，研究LINEl非编码区5’UTR对肿瘤相关miIⅢA及其靶基因的调控作用。简要介绍5’UTR的结构以及所含的双向启动子特征，以及相关文献报道涉及的内源性miIⅢA

4、的来源，本篇论文重点研究LINEl非编码区5’UTR对肿瘤相关miI斟A及其靶基因的调控机理，主要研究内容分为三大部分：一、LINEl5’uTR对己知主要肿瘤相关miRNA表达的影响本部分将LINEl5’UTRRNA双链、正义链、反义链分别转入HEK293细胞，通过荧光定量PCR来检测它们对与肿瘤相关miRNA表达量的影响。二、LINEl5’uTR对候选miIⅢA所调控的靶基因表达的影响本部分将LINEl5’uTRI淤A双链、正义链、反义链分别转入HEK293细胞，通过荧光定量PCR来检测受LINEl5’uTR影响的miRNA的靶基因的

5、表达量的影响。三、LINEl5’UTR对miRNA所调控的靶基因启动子甲基化程度变化的影响本部分通过荧光定量PcR来检测LNEl5’uTR对miRNA靶基因甲基化及去甲基化程度的影响，从而揭示LINEl5’UTR对miRNA及其靶基因的调控机制。研究发现，LINEl非编码区5’UTR对miIⅢA及其靶基因的表达产生了作用，通过甲基化检测发现，LINEl非编码区5’UTR对IIliI斟A靶基因的影响可能不是通过甲基化作用，可能是从转录水平影响到基因的表达。关键词：L矾E1；5’UTR；n缸RNA；肿瘤分类号：Q7ABSTRACTABSTR

6、ACT：hlrccentyears，moreandmorenon-codingsequenceplay1mportantroles·T11erolesofnon．codingsequencein也eregulationofphysiolo酉calandp础olo孕cal，especialiIltu】mo啦卿esis，wereinvestigated丘equently．Mostofnon。Codingsequ吼cesarer印eatsequ饥Ces，whichmostof缸l锄aremobilee1锄ents，mcludlng仕姐‘岬so

7、nandretro廿ansposon．Regardingre仃ot胱lsposons，longim唧ersednucleareleIIlents(LINEs)ismem萄ore1锄entsiIlhumaIlgenomea11dL烈E1ismemove哪helmlngone锄ongm锄，LINEliscomposedofORFl、oRF2aIldnon-cod№re百on5’uTR、3，UTR．Non．codingsequence5’UTRhafborsabidirectional娜Imoter，fonⅣ砌promoter舶mobp，觚d

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