mirna调控纳米sio_2诱导肺损伤靶基因作用的初步研究

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1、表兩：ｋ聲硕±学位论文ｍｉＲＮＡ调控纳米Ｓｉ〇２诱导肺损伤视基因作用的初步研究专业名称：劳动卫生与环培卫生学研巧生姓名：李义嵐导师姓名：杨红菌敞巧本课题获国家自然科学基金面上项目（８１２７３０４６），国家重大科学研究计划项目（２０１１ＣＢ９３３４０４），江苏省预防医学科研课题（Ｙ２０１２０３９），环境医学工程教育部重点实验室开放课题基金（２０ＨＥＭＥ００９）资助。ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＲＥＳＥＡＲＣＨＯＮＲＥＧＵＬＡＴＯＲＹＥＦＦＥＣＴＯＦＭＩＲＮＡＴＯＴＡＲＧＥＴＧＥＮＥＳＩＮＰＵＬＭＯＮＡＲ

2、ＹＩＮＪＵＲＹＩＮＤＵＣＥＤＢＹＮＡＮＯＳＩＯ２ＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｅｄ化ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓ１：ｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＢＹＬＩＷｅｎｃｈａｏＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＡｓｓｏｄａｔｅＰｒｏ拓ｓｓｏｒＹＡＮＧＨｏｎｇＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａｙ２０１５东南大学学位论文独创性声明。尽我所知本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进

3、行的研巧工作及取得的研冗成果，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，也，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果不包含为获一得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧生签名：＿日期：＞広东南大学学位论文使用授权汚明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文巧，一可凶采用影印、缩印或其他复制手段保存讼文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相致。除在巧密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，

4、可Ｗ公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。论文的公布（包括刊登）授权东南大学研巧生院办理。八吃研究生签名：ｉｋ編、导师《名日期：中文摘要ＭｉＲＮＡ调控纳米Ｓｉ〇２诱导肺损伤鞭基因作用的巧步研究研究生：李文超指导老师：杨红副教授东南大学公共卫生学院摘要ＡＢＳＴＲＡＣＴ一纳米二氧化珪（Ｓｉ〇２）广泛应用于几乎涉及微米Ｓｉ〇２的所有领域，由于微米级游离Ｓｉ〇２是种高毒￣性颗粒，经呼吸道吸入可引起巧肺和肺癌，与之有着相同化学姐分的纳米颗粒因其粒径小１００ｎｍ），（ｌ比表面积大。，化学活性高，可能更易对机体尤其是肺脏

5、造成损伤国内外的实验研巧表明纳米Ｓｉ〇２具有细胞毒性及致实验大鼠出现肺组织损伤的作用，但其毒作用机制尚不清楚。随着表观遗传学水平调控作用的发现，微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ巧细胞中广泛的调控作用正逐渐引起人们重视。ｍｉＲＮＡ参与细胞増殖、分化、调ｔ等多种生物进程ｉ、、生，近期许多研巧证实ｍＲＮＡｓ与调控细胞分化肿瘤发生物机体病毒防御有着极密切的关系。有研究结果盈示ｍｉＲＮＡ在肺损伤及纤维化进程中起调控作用。本课题狙前期进行的实验研一究发现，大鼠经气管次性灌注纳米Ｓｉ〇、ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳ巧２０００测序技术分析纳米Ｓｉ〇致大鼠肺损伤２２

6、ｍｉＲＮＡ表达谱变化的结果显示，染尘７、１５、３０ｄ时，染尘大鼠的肺组织病理损伤Ｗ炎症为主，出现肺损－ｍ尘６０、伤差异表达上调的ｍｉＲＮＡ为ｉＲ２０８９０ｄ，差：染时染尘大鼠的肺组织主要表现为肺间质纤维化异表达上调的－－－ｍｉＲＮＡ为ｍｉＲ８ａｍｉｉ組织发生纤维化过程的作用有１。Ｒ２０８与ｍ民１８ａ调控其祀基因参与肺一。对ＮＲ８３８３大鼠肺泡巨隨细胞株染毒待进步验证本研究使用纳米Ｓｉ〇，染毒上清液共培养ＣＨＬ中国２－）ｍ－－仓鼠肺成纤维细胞，运用实时巧光定量ＰＣ民（ＲＴｑＰＣＲ方法分别检测ｉＲ２０８、ｍｉＲ１８ａ表达量；构建－－－ｍｉＲ２０

7、８ｍｉｍｉｃ附ｔ）转染、ｃｓｈ化ｋ模拟物／抑制物（ｓ／ｉｎｈＮＲ８３。细胞ｍｉＲ１８ａｍｉｍｉ／ｉｎ转染ＣＨＬ细施，ＲＴｑＰＣＲ、－－（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ）技术分别检测ｍ、蛋白质印迹法ｉＲ２０８ｍｉＲ１８ａ预测餓基因ＰＤＣＩＭｍＲＮＡ、ＣＴＧＦｍＲＮＡ及蛋白表达，运用巧光素酶报告基因检测ｍｉＲＮＡ与铅基因结合位点对染毒的ＮＲ８３８３细胞上清液进行；Ｌ－－－酶联免疫吸附测定（ＥＩＳＡ法）检测ＴＧＦｐｌ含量，在ＣＨＬ巧胞内阻断ＴＧＦｐｉ信号通路，检测ｍｉＲ１８ａ－－表达量的改变、，Ｗ此探明ｍｉ民２０８ｍｉＲ１８ａ参与纳米Ｓｉ〇导肺损

8、伤过程中对報基因表达的调控作用，２