hbv促进thapsigargin致内质网应激中chop mrna的表达

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1、北京协和医学院硕士研究生学位论文GLSCREsGolgilocalizationsignalcAMPresponseelements高尔基体定位信号cAMP反应原件PDIProteindisulfideisomerase蛋白质二硫键异构酶TregRegulatoryTcells调节性T细胞TGFßTransforminggrowthfactorß转化生长因子自HBsAgHepatitisBsurfaceantigen乙型肝炎表面抗原HBcAgHBxHepatitisBcoreantigenHepatitisBvirusXpr

2、otein乙型肝炎核心抗原乙型肝炎X蛋白2万方数据北京协和医学院硕士研究生学位论文中文摘要研究背景肝细胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)已经成为一个重大的公共卫生挑战，给世界造成了巨大的经济负担。HCC的发病率很高，主要分布在发展中国家。很多因素促成了这种疾病的发生，其中乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染是很重要的一方面。在全球范围内，HBV的慢性携带者超过3．5亿人，每年死于HBV感染的人数超过一百万。在中国，HCC通常是由HBV感染引起的。HBV感染引起大量病毒复制，

3、并在很短的时间内产生大量的病毒蛋白质，从而影响内质网稳态并引起蛋白质的错误折叠。未折叠或错误折叠蛋白质的大量积累导致内质网应激(Endoplasmicreticulumstress，ERs)，从而启动细胞内的未折叠蛋白反应(Unfoldedproteinresponse，UPR)。UPR是多个信号转导通路的总称，在哺乳动物细胞中，可以通过内质网上的三种跨膜感受器蛋白PERK、IREl、ATF6传递信号，启动一系列反应以缓解内质网应激状态；若应激持续进行，不能被缓解，细胞随即启动凋亡程序，这在HCC的病程进展中发挥重要的作用。

4、本研究通过检测在内质网应激时，感染了HBV的HepG2．2．15细胞(HBV+)与未感染HBV的HepG2细胞(HBV。)中UPR信号分子的表达差异，以探讨HBV对HCC细胞系UPR信号通路基因表达的影响。研究方法分别用ATF6一spliced真核表达质粒、tunicamycin(tin)Sothapsigargin(tg)处理未感染HBV的HepG2细胞(HBV‘)和感染了HBV的HepG2．2．15细胞(HBV十)，在处理后4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时提取细胞总RNA。然后通过RT．P

5、CR和qPCR方法分别检测三条未折叠蛋白反应通路，PERK、IREl、ATF6中CHOPmRNA、Xbp—J75mRNA、ATF6mRNA的表达变化情况。研究结果tg处理细胞后检测三种mRNA的表达水平。发现在HepG2．2．15细胞(HBV+)中，CHOPmRNA表达先升高，后保持不变；Xbp—J5mRNA在4小时升高后，持续下降；ATF6mRNA表达水平一直较低，处于波动状态。而在HepG2细胞(HBV‘)中，CHOPmRNA表达先升高，后降低；Xbp．，5mRNA在4小时升高后直到96小时都变化不大：ATF6mRNA表

6、达水平也一直较低。两个细胞系中CHOPmRNA(p

7、表达来促进HCC细胞凋亡。关键词：乙肝病毒：内质网应激；未折叠蛋白反应；thapsigargin(tg)万方数据北京协和医学院硕士研究生学位论文英文摘要I-IBVpromotesCHOPmRNAexpressionduringthapsigargininducedERstressBackgroundsHepatocellularcarcinoma(nCC)isamajorpublichealthchallengesthatresultinginenormousglobalburden．HighincidenceofHCCis

8、mainlydistributedindevelopingcountry．Manyfactorshavecontributedtotheoccurrenceofthedisease，whilehepatitisBvirus(HBV)infectionisaveryimportantaspe