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《纤维素酶转化朝藿定b制备箭藿苷b探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、纤维素酶转化朝藿定B制备箭藿苷B探究［摘要］该实验采用纤维素酶水解朝藿定B以制备箭藿苷B。以转化率为指标，通过单因素考察pH、温度、反应时间、酶用量、底物的浓度对转化率的影响，L9(34)正交试验优化制备工艺；采用MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定水解产物。结果表明，酶解反应的最适条件为温度50°C，反应介质(pH5.6)醋酸-醋酸钠缓冲液，底物质量浓度20g•L-1，酶与底物质量比3:5，反应时间24h，反应产物相对分子质量646.23，核磁图谱证实产物为箭藿苷B。该工艺简单可靠，反应条件温和，适合工业化生产。［关
2、键词］箭藿苷B;朝藿定B;纤维素酶；生物转化［收稿日期］2013-06-25［基金项目］国家自然科学基金项目(30572372，30973944，81274088，81303275)［通信作者］*贾晓斌，博士生导师，Tel:(025)85608672，E-mail：jxiaobin2005@hotmail.com［作者简介］徐凤娟，硕士研究生，Tel:18994024469，E-mail：yx0702fjx@163.com箭藿苷B是小檗科淫羊藿Epimediumbrevicornum中的一种多羟基黄酮类成分。有关箭藿苷B
3、的文献报道大多集中于提取分离和检测2个方面［1-8］。箭藿苷B在淫羊藿药材中含量低，直接从药材中提取分离，不仅所需时间长，步骤繁琐，而且试剂消耗大，产量也较低。而酶解反应具有选择性高，反应条件温和，产物完整，转化率高，分离纯化容易，对环境无污染及成本低廉等优点［9］。纤维素酶是一组由内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及3-葡萄糖苷酶组成的混合酶［10］，可选择性的切断朝藿定B中3-D-葡萄糖糖苷键。本实验研究了纤维素酶水解朝藿定B制备箭藿苷B的工艺，为其工业化生产提供参考。1材料高效液相色谱仪（Waters,600型泵，717自
4、动进样器，Empower数据处理系统）；自动纯化系统（Waters2489紫外-可见光检测器，Waters2767进样阀，Waters2545二元梯度泵，Waters515高效液相泵，Waters3100质谱仪）；数显气浴恒温振荡器（金坛市双捷实验仪器厂）；瑞士Bruker（AV300）核磁共振仪，溶剂为氘代二甲基亚砜（DMSO）。朝藿定B（自制，纯度＞98%）;箭藿苷B（自制，纯度〉98%）;纤维素酶（夏盛实业集团有限公司，酶活力50〜100万U•g-1）;甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。2方法与结
5、果2.1箭藿苷B的制备工艺称取朝藿定B100mg及适量的纤维素酶加入醋酸-醋酸钠缓冲液10mL，于实验条件下反应一定时间，将转化后的混悬液离心，弃去上清液，沉淀用10倍量高纯水洗3次，再用无水乙醇溶解，滤过，滤液水浴挥干，即得箭藿苷B。2.2箭藿苷B转化率的测定2.2.1色谱条件Luna~C18色谱柱（4.6mmX250mm,5um）；流动相乙腈（A）-水（B）,梯度洗脱（0〜29min,25%A；29〜30min，25%〜41%A;30〜55min，41%A；55-60min,41%〜25%A;60〜65min，25%
6、Ao检测波长270nm流速1.0mL•min-1;柱温30°C;进样量20uL。色谱见图1。2.2.2对照品溶液的制备取箭藿苷B10.38mg,精密称定，置于10mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，即得1.038g•L-1箭藿苷B对照品储备液。2.2.3供试品溶液的制备精密量取转化后的混悬液0.2mL置于10mL量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，0.45um微孔滤膜滤过，即得。2.2.4线性关系考察精密量取箭藿苷B储备液，加无水乙醇稀释成166.08，83.04,41.52,20.76,10.38mg•L-1对照品溶液，进样
7、测定。以质量浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归。得回归方程A=34181C-21845,R2=l,线性范围10.38〜166.08mg•L-1。1.朝藿定B;2.箭藿苷B。1对照品(A)和样品(B)的色谱图Fig.IChromatogramsofreferencesubstance(A)andsamplesolution(B)2.2.5精密度试验精密吸取箭藿苷B对照品溶液20uL，重复进样6次，分别测定箭藿苷B的峰面积值，RSD0.030%，表明精密度良好。2.2.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别于
8、0,2,4,8,12,24h时进样测定，RSD1.2%,表明供试品溶液至少在24h内稳定。2.2.7重复性试验按上述方法平行制备5份供试品溶液，依法测定，测得箭藿苷B的平均质量分数为0.25mg,RSD1.8%，表明重复性良好。2.2.8加样回收率试验精密量取供试品溶液0.1mL，精密加入对照品储备溶液0.5mL，用
